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caiyifan

金虫 (小有名气)

[求助] 试剂盒提取与手工提取存在这么大的差异吗? 已有1人参与

我们老师说试剂盒提取DNA保存的时间很短,手工提取的保存时间很长,当然是在同等保存条件下,比如4℃
但,真是这样吗?DNA的降解除了温度外,还跟它们所处的体系有关系吧,但试剂盒提供的TE缓冲液和自配的TE不都一样吗?为什么试剂盒提取的DNA保存时间短呢?我不明白。
另外,降解的情况是不是还跟DNA的浓度相关?比如DNA的浓度高,降解慢,浓度低,降解快。我貌似看到过类似的说法。
请各位虫友帮帮忙。谢谢!!!!!!!!!!!!!!!!
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

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caiyifan: 金币+3 2012-12-17 11:04:57
理论上不会的。老师这么说,可能是根据他之前的比较经验,而这个经验往往不具有统计学意义的。可能是某次试剂盒提取出来后来很快降解了吧;也有可能是不想让你们用kit,毕竟成本高,也不利于锻炼操作,把学生都养懒了。
好些牌子的kit提取的质量和保存时间都有保障 (如 Qiagen)。你如果想保存较长时间,就放到-20,甚至-80去,几个月都没问题的。
2楼2012-12-13 10:36:07
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hraikeyan

金虫 (小有名气)

你们是提基因组吗?这个保存应该没有区别吧,两个之间 的区别在于用手提的过程中机械剪切力小,提出的基因组比较完整,片段大。用试剂盒提取的过程中,由于要过柱子,机械剪切力大,提取的基因组偏小,但是如果只是用于简单的PCR,试剂盒提取的问题不大,如果要勇于建库,还是用手提吧。
nothing isimpossible
8楼2012-12-13 22:03:46
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普通回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)

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caiyifan: 金币+3 2012-12-17 11:01:22
如果都是标准操作的话,好像没明显差别。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2012-12-13 13:48:44
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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caiyifan: 金币+3 2012-12-17 11:01:29
没听说这个问题。一般为了省事就用盒子提。
4楼2012-12-13 14:56:09
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zq347597638

新虫 (小有名气)

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gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2012-12-13 23:12:40
caiyifan: 金币+3 2012-12-17 11:01:35
手提的一般得到的DNA浓度高  可以分装很多管  试剂盒得到的DNA一般浓度都很低  分装的少 DNA一般放在-20保存  你拿出来反复冻融当然不利于保存了
5楼2012-12-13 15:35:23
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huoyongting

金虫 (正式写手)

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caiyifan: 金币+3 2012-12-17 11:01:39
真没听说这种说法,DNA对温度是很稳定的,平时降解应该是有DNA酶的原因
6楼2012-12-13 17:28:00
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

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caiyifan: 金币+3 2012-12-17 11:01:44
操作标准,没有DNA酶污染的情况下质粒还是很稳定的。长期存放最好在-20度,放上几个月问题并不大。
7楼2012-12-13 21:52:14
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

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caiyifan: 金币+3 2012-12-17 11:05:28
我觉得他们的试剂盒里面的成分是经过优化了的,所以要比自己所用的试剂组分要好,至于操作都是不会有太大问题,主要看试剂里面的优化组合。
9楼2012-12-14 10:41:58
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

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caiyifan: 金币+3 2012-12-17 11:02:19
caiyifan: 金币+3 2012-12-17 11:05:38
个人经验还是试剂盒好点,差距明显
让复杂的事情变简单,简单的事情更简单
10楼2012-12-14 11:23:40
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