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kdliming

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[求助] 从枯草芽孢杆菌中提取质粒的注意事项

从枯草芽孢杆菌中提取质粒，应该注意哪些问题？我有几处不明白，请求指点：
1）菌体应该培养多长时间？
2）加入溶菌酶的终浓度按照培养基算，应该是多少，37度作用多长时间？
3）溶菌酶用什么溶解，溶剂PH值是多少？溶菌酶溶液是在4度还是-20保存？我买的干粉要求是-20度保存。
4）提取质粒用限制性酶进行酶切时，发现质粒被切成了smear，有人说是溶菌酶浓度加大了，有人说是溶菌酶作用时间长了，还有人说是菌体培养时间过长.不知道到底是什么原因。
我一般培养过夜（16h左右），溶菌酶终浓度25ug/ml培养液在37度作用半小时。之后出现问题4的情况，请高人指点，谢谢
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1楼 2014-09-15 00:56:20
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