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klot

铁虫 (初入文坛)

[交流] 辣椒DNA提取,跑的电泳图非常诡异,求问题分析 已有7人参与

第一张是昨天晚上跑的,左侧地一个是mark,第二个是空白,后面6个是3个样品,每个样2个孔
电流 180mA
DNA mark 10000bp

第二张是今天上午跑的,因为感觉有什么地方不对,所以进行了一点调整
电压 120V
电流 153mA
DNA mark 10000bp


同学说可能是TAE液有问题,下午或者晚上我打算换一下试试,不知道还可能是其他问题不?会不会DNA根本没出来呢?为什么mark会跑成这个样子?谢谢
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
从条带的位置来说,基因组DNA应该没有抽提出来,胶图上的条带可能是RNA
rainwater
3楼2014-09-11 11:30:48
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普通回帖

bwangel

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-11 09:22:41
先别想的样本,DNA的问题,marker都跑不好就是胶和电解液的问题,或者电泳仪的问题
2楼2014-09-11 08:38:16
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dls1987

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-14 09:27:33
首先 如上所说 marker都跑不好就是胶和电解液的问题,或者电泳仪的问题
其次 孔道有亮的 可能存在蛋白质污染 即蛋白质没有去除干净
最后 条带拖带 多半的由于降解了 这个可以从原材料是否新鲜 操作是否正确等上面寻找原因
4楼2014-09-12 09:47:52
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紫夜微蓝

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
电压降低一些,调到75V试试。另外胶可能做得有问题,是百分之几的胶?电泳缓冲液成分和浓度有没有问题
5楼2014-09-12 15:56:26
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
很大可能是TAE的问题,是不是忘加醋酸了,记得之前有一次配TAE忘记加醋酸就是这种结果
科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
6楼2014-09-13 09:11:36
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南楚狂人

银虫 (小有名气)

电压再稍微调高一点,根据光谱图,我得出的结论是辣椒的DNA分子链粘在一起了。

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-09-13 09:37:13
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laojiu9878

至尊木虫 (文坛精英)

九牛


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-14 09:27:24
重新开始,严格按照操作步骤做,提取和电泳技术有问题
但愿人长久
8楼2014-09-13 10:23:13
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klot

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by dehong1573 at 2014-09-13 09:11:36
很大可能是TAE的问题,是不是忘加醋酸了,记得之前有一次配TAE忘记加醋酸就是这种结果

TAE我又重新配置了一次,两次都加了醋酸了。后来发现marker点样量缩小到1uL 就不会托带了,不过抖动的问题还是没有解决
9楼2014-09-15 13:03:55
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klot

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 紫夜微蓝 at 2014-09-12 15:56:26
电压降低一些,调到75V试试。另外胶可能做得有问题,是百分之几的胶?电泳缓冲液成分和浓度有没有问题

0.7%的胶,昨天我试了一下1%的胶,居然无法显示maker!整个胶白花花一片。。。(我没有忘记加现色剂,用的是 SYBR GREEN I)
10楼2014-09-15 13:06:00
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