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swach

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 2658555
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性别: MM
专业: 污染控制化学

[求助] 同样的实验操作，同样的试剂，为什么测序结果差很多已有1人参与

做nosZ（470）基因的克隆文库，top10感受态细胞，T4的载体，步骤都是一样的，菌落PCR检测有条带。上次挑菌送出去测序，测序结果是467bp作用，NCBI比对之后，结果是不可培养的反硝化基因。可是这次测序回来的结果是1560多bp，NCBI比对全部都是同一种结果，和我要研究的基因一点关系都没有。发邮件给测序公司，他们的解释是：我送去的是质粒，质粒是环状的，不会出现终止峰，是会一直延伸下去的。
我知道的是，测序结果长度是插入片段长度和引物长度的和，所以应该不会有1500多那么长吧？真的是无语了。求大神帮忙！

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同一个平板上挑的两个菌测序，序列差很多，大家帮我看看啊，有比对图！谢谢啦已经有18人回复

1楼 2014-09-06 17:15:36

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bwangel

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-07 17:47:29

载体两端跑胶跑出来是多少，测序就是多少，告诉测序公司两端测拼接，又不是单向测通，什么环状的，谁不知道是环状的啊，不是目的片段去测什么，你最好找正规点的测序公司，别找小公司，他们有可能敷衍你，和他们要下测序的通用引物，跑个胶就知道了，如果也是1500就说明你样本的问题，

2楼2014-09-07 09:10:01

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