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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 工艺研究 » 有没有色谱柱的大神啊？！！求助！！
汕头大学海洋科学接受调剂
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大饼先生

新虫 (初入文坛)

[求助] 有没有色谱柱的大神啊？！！求助！！ 已有6人参与

最近用盐酸胍和TFA结合小核酸，跑了C18的HPLC，样品有点浑浊，然后进样了，杂质在C18上残留了，有没有什么办法洗掉啊？常规的反接色谱柱什么的都试过了，现在由于柱子堵了，压力一直升高，跪求洗脱办法！谢谢~
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1楼 2014-09-03 17:07:22
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lionguy

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
大饼先生(zhychen2008代发): 金币+1, 多谢回帖交流 2014-09-04 21:56:53
1、这些问题最好在事先预防，不要出了问题再耗神去解决！
2、给色谱柱前段加装一个预柱，对色谱柱进行有效地保护。菲罗门的预柱就很好用（比较短小，不占地方），一个预柱1500元钱，另外，购买10个滤芯，每个滤芯100元；我已经用了9年了，总共更换了4个滤芯。预柱永远不会损坏的！当柱压过高时，首先会堵塞滤芯，而不是色谱柱子。更换已经用脏的滤芯即可。
3、购买1个全玻璃过滤漏斗（包括滤膜），将流动相在使用前过滤、脱气，天津奥特赛恩斯的比较好用。
4、购买若干多的针头式过滤器（一次性的），每个1元；样品待测液进入进样瓶时过滤一下。
5、以上是搞色谱工作必备的基本配置，配置齐全了，麻烦就少了！可确保工作的顺利进行。
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10楼2014-09-04 10:14:07
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voyager88

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
大饼先生(zhychen2008代发): 金币+1, 多谢回帖交流 2014-09-04 21:55:26
1.下次走的时候一定要滤过，外加保护柱
2.当前的柱子可以5%-10%的甲醇水正冲不行的话，以0.1-0.5ml/min的流速反冲过夜，第二天正接看看能不能用吧，能用的话就接着用，不行再活化一下，实在不行只能丢了
3.可以把柱头的筛网取下清洗
4.如果柱头污染，可以把部分填料抠掉
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微信公众号：Pharmaguider（药事纵横），主页：www.pharmaguider.cn
3楼2014-09-03 17:19:52
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zzl198338

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
大饼先生(zhychen2008代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2014-09-04 21:55:04
对色谱柱的处理，有一个从大极性溶剂到小极性溶剂逐步清洗的方法的，四氢呋喃，二氯甲烷，异丙醇，甲醇，小流速，长时间冲洗，看看有没有效果。对于你这种情况，最好把柱子倒过来冲洗。这样可能会好点。
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7楼2014-09-04 08:20:25
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revil2010

捐助贵宾 (小有名气)

巴巴拉
引用回帖:
8楼: Originally posted by 大饼先生 at 2014-09-04 09:37:51
过滤的话小核酸以及里面要测的物质就被过滤掉了。。。。唉。。。倒着冲也试过了，用的是乙腈，但是还是不行，另外，又一次流动相不小心走空了，估计处理没完全，里面还含有气泡，下一步我打算用异丙醇冲冲试试看吧 ...

目测都能看到浑浊的话确实不该直接进液相，担心过滤掉太多东西的话，至少应该离心下，至少肉眼澄清才能进液相的。
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Getyourway
13楼2014-09-04 11:18:01
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普通回帖

深圳卓越生物

禁言 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
2楼2014-09-03 17:12:44
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星海慧儿

荣誉版主 (职业作家)

木虫精灵

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
大饼先生(zhychen2008代发): 金币+1, 多谢回帖交流 2014-09-04 21:55:38
如果什么方法都试了均无效的话，试试异丙醇水溶液吧，异丙醇浓度可以先从5%开始，倒着洗。
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我是超级天后：天天努力，不落人后！
4楼2014-09-03 17:30:20
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羅丹

铁虫 (小有名气)
专业课上正在学色谱的小白飘过，我就进来看看大神们怎么说

[ 发自小木虫客户端 ]
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河清海晏，时和岁丰。
5楼2014-09-03 18:24:17
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dxx1219

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
低流速，先用10%的乙腈冲个几个小时，再用90%乙腈冲几个小时。倒冲
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一切皆有可能
6楼2014-09-04 06:58:39
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大饼先生

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by voyager88 at 2014-09-03 17:19:52
1.下次走的时候一定要滤过，外加保护柱
2.当前的柱子可以5%-10%的甲醇水正冲不行的话，以0.1-0.5ml/min的流速反冲过夜，第二天正接看看能不能用吧，能用的话就接着用，不行再活化一下，实在不行只能丢了
3.可以把 ...

过滤的话小核酸以及里面要测的物质就被过滤掉了。。。。唉。。。倒着冲也试过了，用的是乙腈，但是还是不行，另外，又一次流动相不小心走空了，估计处理没完全，里面还含有气泡，下一步我打算用异丙醇冲冲试试看吧，您有什么j建议？
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8楼2014-09-04 09:37:51
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大饼先生

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by voyager88 at 2014-09-03 17:19:52
1.下次走的时候一定要滤过，外加保护柱
2.当前的柱子可以5%-10%的甲醇水正冲不行的话，以0.1-0.5ml/min的流速反冲过夜，第二天正接看看能不能用吧，能用的话就接着用，不行再活化一下，实在不行只能丢了
3.可以把 ...

进口的C18柱子用之前也要活化吗？我一般就按照说明书上有个对照用90%的甲醇走一下，我就看跟说明上压力差不多就行了
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9楼2014-09-04 09:41:32
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