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大饼先生

新虫 (初入文坛)

[求助] 有没有色谱柱的大神啊?!!求助!!已有6人参与

最近用盐酸胍和TFA结合小核酸,跑了C18的HPLC,样品有点浑浊,然后进样了,杂质在C18上残留了,有没有什么办法洗掉啊?常规的反接色谱柱什么的都试过了,现在由于柱子堵了,压力一直升高,跪求洗脱办法!谢谢~
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lionguy

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


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大饼先生(zhychen2008代发): 金币+1, 多谢回帖交流 2014-09-04 21:56:53
1、这些问题最好在事先预防,不要出了问题再耗神去解决!
2、给色谱柱前段加装一个预柱,对色谱柱进行有效地保护。菲罗门的预柱就很好用(比较短小,不占地方),一个预柱1500元钱,另外,购买10个滤芯,每个滤芯100元;我已经用了9年了,总共更换了4个滤芯。预柱永远不会损坏的!当柱压过高时,首先会堵塞滤芯,而不是色谱柱子。更换已经用脏的滤芯即可。
3、购买1个全玻璃过滤漏斗(包括滤膜),将流动相在使用前过滤、脱气,天津奥特赛恩斯的比较好用。
4、购买若干多的针头式过滤器(一次性的),每个1元;样品待测液进入进样瓶时过滤一下。
5、以上是搞色谱工作必备的基本配置,配置齐全了,麻烦就少了!可确保工作的顺利进行。
10楼2014-09-04 10:14:07
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voyager88

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


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大饼先生(zhychen2008代发): 金币+1, 多谢回帖交流 2014-09-04 21:55:26
1.下次走的时候一定要滤过,外加保护柱
2.当前的柱子可以5%-10%的甲醇水正冲不行的话,以0.1-0.5ml/min的流速反冲过夜,第二天正接看看能不能用吧,能用的话就接着用,不行再活化一下,实在不行只能丢了
3.可以把柱头的筛网取下清洗
4.如果柱头污染,可以把部分填料抠掉
微信公众号:Pharmaguider(药事纵横),主页:www.pharmaguider.cn
3楼2014-09-03 17:19:52
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zzl198338

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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大饼先生(zhychen2008代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2014-09-04 21:55:04
对色谱柱的处理,有一个从大极性溶剂到小极性溶剂逐步清洗的方法的,四氢呋喃,二氯甲烷,异丙醇,甲醇,小流速,长时间冲洗,看看有没有效果。对于你这种情况,最好把柱子倒过来冲洗。这样可能会好点。
7楼2014-09-04 08:20:25
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revil2010

捐助贵宾 (小有名气)

巴巴拉

引用回帖:
8楼: Originally posted by 大饼先生 at 2014-09-04 09:37:51
过滤的话小核酸以及里面要测的物质就被过滤掉了。。。。唉。。。倒着冲也试过了,用的是乙腈,但是还是不行,另外,又一次流动相不小心走空了,估计处理没完全,里面还含有气泡,下一步我打算用异丙醇冲冲试试看吧 ...

目测都能看到浑浊的话确实不该直接进液相,担心过滤掉太多东西的话,至少应该离心下,至少肉眼澄清才能进液相的。
Getyourway
13楼2014-09-04 11:18:01
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普通回帖

深圳卓越生物

禁言 (初入文坛)

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2楼2014-09-03 17:12:44
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星海慧儿

荣誉版主 (职业作家)

木虫精灵

优秀版主优秀版主

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大饼先生(zhychen2008代发): 金币+1, 多谢回帖交流 2014-09-04 21:55:38
如果什么方法都试了均无效的话,试试异丙醇水溶液吧,异丙醇浓度可以先从5%开始,倒着洗。
我是超级天后:天天努力,不落人后!
4楼2014-09-03 17:30:20
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羅丹

铁虫 (小有名气)

专业课上正在学色谱的小白飘过,我就进来看看大神们怎么说

[ 发自小木虫客户端 ]
河清海晏,时和岁丰。
5楼2014-09-03 18:24:17
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dxx1219

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
低流速,先用10%的乙腈冲个几个小时,再用90%乙腈冲几个小时。倒冲
一切皆有可能
6楼2014-09-04 06:58:39
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大饼先生

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by voyager88 at 2014-09-03 17:19:52
1.下次走的时候一定要滤过,外加保护柱
2.当前的柱子可以5%-10%的甲醇水正冲不行的话,以0.1-0.5ml/min的流速反冲过夜,第二天正接看看能不能用吧,能用的话就接着用,不行再活化一下,实在不行只能丢了
3.可以把 ...

过滤的话小核酸以及里面要测的物质就被过滤掉了。。。。唉。。。倒着冲也试过了,用的是乙腈,但是还是不行,另外,又一次流动相不小心走空了,估计处理没完全,里面还含有气泡,下一步我打算用异丙醇冲冲试试看吧,您有什么j建议?
8楼2014-09-04 09:37:51
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大饼先生

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by voyager88 at 2014-09-03 17:19:52
1.下次走的时候一定要滤过,外加保护柱
2.当前的柱子可以5%-10%的甲醇水正冲不行的话,以0.1-0.5ml/min的流速反冲过夜,第二天正接看看能不能用吧,能用的话就接着用,不行再活化一下,实在不行只能丢了
3.可以把 ...

进口的C18柱子用之前也要活化吗?我一般就按照说明书上有个对照用90%的甲醇走一下,我就看跟说明上压力差不多就行了
9楼2014-09-04 09:41:32
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