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秋海棠2010

新虫 (初入文坛)

[求助] 细胞转染 transfection

插入5-HT的细胞转染后发现转染率比较低,然后我在想办法将转染率提高。一开始用的是
DNA:lipofectamin=1:2(6ug:12ul),这个比例是师兄验证过的,说这个比例细胞死亡率比较低,所以我用这个比例,但是转染率我这样做比较低,师兄也说不知问什么转染率会低。 所以如果我现在想寻求optimal ratio and increase the amount of DNA, 我该怎么设计实验呢?
DNA(ug)        Lipofectamine (ul)        Opti(ul)
Rac1        6        12        750
5-HT1a        6        12        750
5-HT1a        12        24        750
5-HT1a        18        36        750
5-HT1a        6        18        750
GFP        6        12        750
NT        0        0        0
此外,关于这张表,1. opti 的量需要随 5-HT1a DNA 的量的改变而改变吗?倍数? 2. 不同量的5-HT1a DNA, 需不需要设置相应的阳性对照? 比如12ug 5-HT1a 的DNA 对照 12ug Rac1 和12ug GFP?
谢谢大神指教,我刚进实验室半个月什么都不懂,以前师兄已经离开实验室了,找不到他做的详细笔记了,所以,急求指导~谢谢~
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夏至1990

金虫 (小有名气)

小小虫

可以试着提高质粒和转染试剂的比例,但是换液时间要摸好
Sodoyouwanttotakealeapoffaith…orbecomeanoldman,filledwithregret…waitingtodiealone?
2楼2014-11-05 19:17:15
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