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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 关于Tris-HCl缓冲液的问题
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z631535213

木虫 (正式写手)

[求助] 关于Tris-HCl缓冲液的问题 已有4人参与

配制的Tris-HCl（0.05mol/L，25℃）若干PH区间度的缓冲液用于  病毒DNA的提取与PCR  中。
1.这个缓冲液需要灭菌吗？要是需要灭菌，请问该怎么灭菌？高温高压还是还是用超滤膜？高温高压灭菌后会不会PH有很大的影响呢
2.Tris溶液我能不能配成母液的形式储存，用的时候稀释到需要的程度？
拜谢各位虫友。
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1楼 2014-08-27 11:20:49
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

帖航

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
z631535213: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-09-01 10:36:59
z631535213: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-09-01 10:38:24
是的DNA提取一般是不用灭菌的，如果想灭菌可以用湿热灭菌（tris，TES都可以），配置成母液用时稀释，根据Henderson-Hasselbalch方程，pH不会变化，但是实际上有波动，不过影响不大。用缓冲液最重要的是注意缓冲范围，特定温度下查pKa，缓冲范围在pKa±0.5
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5楼2014-08-28 10:19:33
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新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
配的量大的话最好灭菌，这样保存的时间更长

[ 发自小木虫客户端 ]
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9楼2014-08-28 16:28:32
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帖航

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
z631535213: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-09-01 10:37:19
引用回帖:
13楼: Originally posted by z631535213 at 2014-08-29 10:51:32
请问下，如果说我配好了1M的Tris-HCl  PH 8.0的缓冲液 ，用时需要用10mM的Tris-HCl    PH8.0的缓冲液，能不能直接取10ml 1M的母液通过稀释到1L来达到？稀释后PH应该会变化的吧？不是生化的科班出生，见笑了。...

无机及分析化学中学的Henderson-Hasselbalch公式加上同离子效应，只要水中没有其他离子干扰，缓冲液稀释pH是不会变的，但实际中的水达不到无离子，尤其是蒸馏水，无论蒸馏多少次，水中都会残留离子，所以稀释以后会有波动，但是波动很小不影响使用。100×稀释没问题。你实在不放心就稀释以后测测看。使用缓冲要注意缓冲范围，比如pH8.0的Tris-HCl在4℃下就几乎没有缓冲能力了。
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14楼2014-08-29 15:11:28
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
z631535213: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-09-01 10:36:31
若是用于DNA提取，灭不灭菌可能问题都不大，不放心就过滤一下。
当然可以。我们都是买1M的Tris，pH值可以是8.0， 7.0 或7.5。需要时稀释或者取一点用于配置其他buffer就行了。
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2楼2014-08-27 11:39:27
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接配1倍浓度，过滤除菌。母液稀释后pH肯定变化，而且高浓度的Tris调pH都难。
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6楼2014-08-28 10:48:30
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帖航

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by z631535213 at 2014-08-28 16:30:30
那是不是还是现配现用的好？我这Tris用量有些大，要配成不同PH区间度的Tris-HCl的缓冲液...

TRIS缓冲液可以较长时间保存，灭菌后封起来放在低温，高浓度也可以防止杂菌滋生，缓冲液稀释对pH影响不大，不信你试试，不过tris缓冲液对温度很敏感。
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12楼2014-08-29 10:23:51
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z631535213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-27 11:39:27
若是用于DNA提取，灭不灭菌可能问题都不大，不放心就过滤一下。
当然可以。我们都是买1M的Tris，pH值可以是8.0， 7.0 或7.5。需要时稀释或者取一点用于配置其他buffer就行了。

能问一下为什么用于DNA提取灭不灭菌可能问题都不大
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3楼2014-08-28 08:57:54
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by z631535213 at 2014-08-27 19:57:54
能问一下为什么用于DNA提取灭不灭菌可能问题都不大...

DNA相对较为稳定（不像RNA），所以不太会受影响。
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4楼2014-08-28 08:59:26
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z631535213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-28 08:59:26
DNA相对较为稳定（不像RNA），所以不太会受影响。...

提纯后我还要进行PCR，这个也没影响吗？
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7楼2014-08-28 16:25:50
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z631535213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 帖航 at 2014-08-28 10:19:33
是的DNA提取一般是不用灭菌的，如果想灭菌可以用湿热灭菌（tris，TES都可以），配置成母液用时稀释，根据Henderson-Hasselbalch方程，pH不会变化，但是实际上有波动，不过影响不大。用缓冲液最重要的是注意缓冲范围 ...

提纯后我还要进行PCR，这个也没影响吗？
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8楼2014-08-28 16:28:23
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z631535213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-08-28 10:48:30
直接配1倍浓度，过滤除菌。母液稀释后pH肯定变化，而且高浓度的Tris调pH都难。

那是不是还是现配现用的好？我这Tris用量有些大，要配成不同PH区间度的Tris-HCl的缓冲液
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10楼2014-08-28 16:30:30
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