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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教Tris-Hcl 缓冲液的配制问题！
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98wawa

铜虫 (小有名气)

[求助] 请教Tris-Hcl 缓冲液的配制问题！

我要配PH=7.4的 34mM 的缓冲液，请问该怎么配呢？
我看的方法都是配的50mM的，如果我稀释了，那不是PH也变了？反过来，我先调好了PH，再来加酸调节浓度的话，PH后来也是会变的吧？
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1楼 2013-05-10 15:43:44
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
98wawa: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-05-10 18:33:06
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-10 22:47:22
gyesang: 回帖置顶 2013-05-10 22:47:54
其实15楼说的很对!你应该先搞清楚基础知识，掌握基础知识，有利于你更好的做实验！
我就不多说了，把表格传给你吧!
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  • 附件 1 : 常见buffer的配置.doc
    • 2013-05-10 18:18:52, 87.5 K
长得比我英俊的，没我有才华！有才华的，没我长得俊！
17楼2013-05-10 18:19:23
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+4, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-05-10 18:44:10
诶！孩子你想多了！配试剂，你要先明白其道理，再去配好不好！知其然，知其所以然！
配制Tris-Hcl  buffer是先计算好需要称取Tris的量！再用ddH2O溶解，然后调节pH,最后定容！
例如我需要配制34mM Tris-Hcl  buffer 1L，pH=7.4
第一步：计算Tris的质量：0.034M*1L*121.14(分子量)=4.12g;
第二步：加ddH2O搅拌溶解，总体积要少于1L，因为你还要调节pH;
第三步：用Hcl调节pH至7.4为止！
第四步：用1L容量瓶定容至1L！
第五步：将配置好的溶液用洗干净的容器装起来四度放置，或室温放置！
这就配好了，各位大侠不要见笑啊！
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长得比我英俊的，没我有才华！有才华的，没我长得俊！
2楼2013-05-10 16:00:41
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-10 22:47:13
引用回帖:
6楼: Originally posted by 98wawa at 2013-05-10 16:41:46
文献里写到的是0.1 M NaCl, 10 mM phosphate buffer (pH 7.0)
应该是不含盐的，缓冲液配好了，再加 NaCl吧...

楼主！你赢了！！！你肯定不是搞生物的！
含有0.1M的NaCl叫“应该是不含盐的”？？？·············
NaCl就是盐啊！！！
配buffer，是将所有东西称好，再加水溶解！然后再用酸或者减调节pH!最后定容！
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8楼2013-05-10 16:57:42
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

用浓盐酸，还是稀盐酸，就看你的操作水平了！我一般就用浓盐酸直接调！一般实验室用1~2M HCl调pH!NaOH 我喜欢配置4M的！个人习惯不同吧····
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    • 2013-05-10 18:24:09, 87.5 K
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19楼2013-05-10 18:24:47
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liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看来原理你还是没有搞懂呀
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5楼2013-05-10 16:23:48
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)
如果你看的东西多了，和经验丰富的人接触多了，你也就大神这些人没什么了，大家都是人而已····
各位路过的大神，不喜勿喷啊！！！我只是说说我的见解！
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25楼2013-05-10 21:05:03
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普通回帖

98wawa

铜虫 (小有名气)
非常感谢。。。
能再问问 10mM的PBS怎么配不。。。ph=7的
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3楼2013-05-10 16:16:56
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-10 22:47:31
你先知道PBS是什么东西，它是磷酸盐(含有NaCl)缓冲液。不知道你的PBS带不带盐的，现在还有许多人认为PBS就是磷酸盐缓冲液！
也不知道你配多少浓度NaCl的PBS？
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长得比我英俊的，没我有才华！有才华的，没我长得俊！
4楼2013-05-10 16:23:15
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98wawa

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 不转录的DNA at 2013-05-10 16:23:15
你先知道PBS是什么东西，它是磷酸盐(含有NaCl)缓冲液。不知道你的PBS带不带盐的，现在还有许多人认为PBS就是磷酸盐缓冲液！
也不知道你配多少浓度NaCl的PBS？

文献里写到的是0.1 M NaCl, 10 mM phosphate buffer (pH 7.0)
应该是不含盐的，缓冲液配好了，再加 NaCl吧
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6楼2013-05-10 16:41:46
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98wawa

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by liyu0355 at 2013-05-10 16:23:48
看来原理你还是没有搞懂呀

是不是配溶液都是先调节PH再定容，
我原来以为调好了PH再加水 PH会变。。。。
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7楼2013-05-10 16:45:07
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98wawa

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 不转录的DNA at 2013-05-10 16:57:42
楼主！你赢了！！！你肯定不是搞生物的！
含有0.1M的NaCl叫“应该是不含盐的”？？？·············
NaCl就是盐啊！！！
配buffer，是将所有东西称好，再加水溶解！然后再用酸或者减调节pH!最后定容 ...

我的意思是10 mM phosphate buffer 里面不含盐，只用磷酸氢二钠和磷酸二氢钠配，
然后再加NaCl  

不是有的缓冲液里面都有加Nacl  Kcl 吗？
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9楼2013-05-10 17:02:55
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)
楼主是人才
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10楼2013-05-10 17:04:59
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