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98wawa

铜虫 (小有名气)

[求助] 请教Tris-Hcl 缓冲液的配制问题!

我要配PH=7.4的 34mM 的缓冲液,请问该怎么配呢?
我看的方法都是配的50mM的,如果我稀释了,那不是PH也变了?反过来,我先调好了PH,再来加酸调节浓度的话,PH后来也是会变的吧?
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+4, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-05-10 18:44:10
诶!孩子你想多了!配试剂,你要先明白其道理,再去配好不好!知其然,知其所以然!
配制Tris-Hcl  buffer是先计算好需要称取Tris的量!再用ddH2O溶解,然后调节pH,最后定容!
例如我需要配制34mM Tris-Hcl  buffer 1L,pH=7.4
第一步:计算Tris的质量:0.034M*1L*121.14(分子量)=4.12g;
第二步:加ddH2O搅拌溶解,总体积要少于1L,因为你还要调节pH;
第三步:用Hcl调节pH至7.4为止!
第四步:用1L容量瓶定容至1L!
第五步:将配置好的溶液用洗干净的容器装起来四度放置,或室温放置!
这就配好了,各位大侠不要见笑啊!
长得比我英俊的,没我有才华!有才华的,没我长得俊!
2楼2013-05-10 16:00:41
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
98wawa: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-05-10 18:33:06
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-10 22:47:22
gyesang: 回帖置顶 2013-05-10 22:47:54
其实15楼说的很对!你应该先搞清楚基础知识,掌握基础知识,有利于你更好的做实验!
我就不多说了,把表格传给你吧!

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  • 附件 1 : 常见buffer的配置.doc
  • 2013-05-10 18:18:52, 87.5 K
长得比我英俊的,没我有才华!有才华的,没我长得俊!
17楼2013-05-10 18:19:23
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-10 22:47:13
引用回帖:
6楼: Originally posted by 98wawa at 2013-05-10 16:41:46
文献里写到的是0.1 M NaCl, 10 mM phosphate buffer (pH 7.0)
应该是不含盐的,缓冲液配好了,再加 NaCl吧...

楼主!你赢了!!!你肯定不是搞生物的!
含有0.1M的NaCl叫“应该是不含盐的”???·············
NaCl就是盐啊!!!
配buffer,是将所有东西称好,再加水溶解!然后再用酸或者减调节pH!最后定容!
长得比我英俊的,没我有才华!有才华的,没我长得俊!
8楼2013-05-10 16:57:42
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

用浓盐酸,还是稀盐酸,就看你的操作水平了!我一般就用浓盐酸直接调!一般实验室用1~2M HCl调pH!NaOH 我喜欢配置4M的!个人习惯不同吧····

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  • 附件 1 : 常见buffer的配置.doc
  • 2013-05-10 18:24:09, 87.5 K
长得比我英俊的,没我有才华!有才华的,没我长得俊!
19楼2013-05-10 18:24:47
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liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看来原理你还是没有搞懂呀
5楼2013-05-10 16:23:48
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

如果你看的东西多了,和经验丰富的人接触多了,你也就大神这些人没什么了,大家都是人而已····
各位路过的大神,不喜勿喷啊!!!我只是说说我的见解!
长得比我英俊的,没我有才华!有才华的,没我长得俊!
25楼2013-05-10 21:05:03
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普通回帖

98wawa

铜虫 (小有名气)

非常感谢。。。
能再问问 10mM的PBS怎么配不。。。ph=7的
3楼2013-05-10 16:16:56
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-10 22:47:31
你先知道PBS是什么东西,它是磷酸盐(含有NaCl)缓冲液。不知道你的PBS带不带盐的,现在还有许多人认为PBS就是磷酸盐缓冲液!
也不知道你配多少浓度NaCl的PBS?
长得比我英俊的,没我有才华!有才华的,没我长得俊!
4楼2013-05-10 16:23:15
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98wawa

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 不转录的DNA at 2013-05-10 16:23:15
你先知道PBS是什么东西,它是磷酸盐(含有NaCl)缓冲液。不知道你的PBS带不带盐的,现在还有许多人认为PBS就是磷酸盐缓冲液!
也不知道你配多少浓度NaCl的PBS?

文献里写到的是0.1 M NaCl, 10 mM phosphate buffer (pH 7.0)
应该是不含盐的,缓冲液配好了,再加 NaCl吧
6楼2013-05-10 16:41:46
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98wawa

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by liyu0355 at 2013-05-10 16:23:48
看来原理你还是没有搞懂呀

是不是配溶液都是先调节PH再定容,
我原来以为调好了PH再加水 PH会变。。。。
7楼2013-05-10 16:45:07
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98wawa

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 不转录的DNA at 2013-05-10 16:57:42
楼主!你赢了!!!你肯定不是搞生物的!
含有0.1M的NaCl叫“应该是不含盐的”???·············
NaCl就是盐啊!!!
配buffer,是将所有东西称好,再加水溶解!然后再用酸或者减调节pH!最后定容 ...

我的意思是10 mM phosphate buffer 里面不含盐,只用磷酸氢二钠和磷酸二氢钠配,
然后再加NaCl  

不是有的缓冲液里面都有加Nacl  Kcl 吗?
9楼2013-05-10 17:02:55
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)

楼主是人才
10楼2013-05-10 17:04:59
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