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七小艾

新虫 (小有名气)

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[求助] 双向电泳水化上样，溴酚蓝会影响BCA法或者考马斯亮蓝法的蛋白质定量吗？已有1人参与

双向电泳的几个问题，求各位不吝赐教~~
1、双向电泳上样前需要对蛋白质进行定量，但是水化液里有溴酚蓝，请教各位溴酚蓝是否会影响BCA法或者Bradford法的定量？
2、BCA法受DTT干扰，那如果我是先定量，再加DTT是不是就可以用BCA法来定量？BCA法会受水化液中其他组分的影响吗？
3、水化液不能反复冻融，DTT要现加，但是DTT加的量少而且易潮解，不好称量，我想将DTT配成母液，用时加入母液，但有个问题，水化液不能反复冻融，DTT是不是也不能反复冻融？DTT母液应该怎么保藏呢？

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1楼 2014-08-23 16:53:59

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proteomicszj

新虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
七小艾: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-08-31 22:08:03

1、双向电泳上样前需要对蛋白质进行定量，但是水化液里有溴酚蓝，请教各位溴酚蓝是否会影响BCA法或者Bradford法的定量？

水化液一般不加溴酚蓝。溴酚蓝有颜色，当然影响定量。
2、BCA法受DTT干扰，那如果我是先定量，再加DTT是不是就可以用BCA法来定量？BCA法会受水化液中其他组分的影响吗？

水化液一般不加DTT。只有在IEF前现配加入。
3、水化液不能反复冻融，DTT要现加，但是DTT加的量少而且易潮解，不好称量，我想将DTT配成母液，用时加入母液，但有个问题，水化液不能反复冻融，DTT是不是也不能反复冻融？DTT母液应该怎么保藏呢？
DTT现配现加。或者少量保存在-20C,只用一两次。