24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 4412  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

pcwcp

铜虫 (初入文坛)

[求助] 真核表达载体构建成功但是不表达目的蛋白,大家帮忙分析一下原因谢谢 已有4人参与

请教一下表达载体构建的问题。。我构建了两个真核表达载体分别为pcDNA3.1(+)及pcMV-myc,要表达的目的蛋白为(序列1527bp大小),55kD大小的糖蛋白,载体构建测序正确,以空载体作为对照,脂质体2000转染293以及293T细胞western blot结果都显示不表达。现在非常郁闷,不知道问题出自哪里。希望您帮助分析一下。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

放完气的可乐

新虫 (初入文坛)

本人愚见,可能是你的蛋白还受到别的调控机制才能表达
9楼2015-03-21 09:18:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

hutingting

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-08-11 20:16:24
首先确定western blot方法是工作的,要有阳性对照,之前我们遇到过这种情况,我们没有阳性对照样品,折腾了好久,换了一家买抗体就行了
2楼2014-08-11 15:09:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pcwcp

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hutingting at 2014-08-11 15:09:24
首先确定western blot方法是工作的,要有阳性对照,之前我们遇到过这种情况,我们没有阳性对照样品,折腾了好久,换了一家买抗体就行了

一抗体是横向课题另外一个研究所制备的多抗,应该没问题。二抗我也换了两家了,用的是sigma的。。现在的关键是跑page没有目的条带。。蛋白不表达。
3楼2014-08-11 15:21:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvshilu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-08-11 20:16:51
1. 表达的目的蛋白应该在哪里,是分泌性抗体吗?
2. 你用的试剂盒吧,联系厂家。
3. 试剂是否受损过,比如冰箱停电什么的。
祝好远!
需要金币
4楼2014-08-11 17:38:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿985机械学硕380求调剂 +5 关关雎鸠10 2026-04-11 5/250 2026-04-11 10:10 by 知念。A
[考研] 0831生医工第一轮调剂失败求助 +10 小熊睿睿_s 2026-04-11 13/650 2026-04-11 10:04 by maddjdld
[考研] 材料与化工调剂 10+11 下一站上岸@ 2026-04-10 35/1750 2026-04-11 07:08 by laoshidan
[考研] 一志愿211,化学310分,本科重点双非,求调剂 +23 努力奋斗112 2026-04-08 23/1150 2026-04-10 23:29 by 314126402
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +6 白云123456789 2026-04-09 8/400 2026-04-10 21:13 by zhouxiaoyu
[考研] 机械专368 有去处吗 +4 种大树 2026-04-10 4/200 2026-04-10 15:31 by jiajinhpu
[考研] 材料调剂 +13 一样YWY 2026-04-04 13/650 2026-04-10 11:07 by mattzhming
[考研] 一志愿中科大070300化学,314分求调剂 +12 wakeluofu 2026-04-09 12/600 2026-04-10 09:57 by liuhuiying09
[考研] 296求调剂 +6 汪!?! 2026-04-09 6/300 2026-04-09 20:49 by lbsjt
[考研] 0860004 求调剂 309分 +7 Yin DY 2026-04-08 7/350 2026-04-09 14:06 by ditto77778
[考研] 285求调剂 +20 哦呦呼o 2026-04-04 20/1000 2026-04-08 22:23 by yutian743
[考研] 296求调剂 +3 汪!?! 2026-04-08 3/150 2026-04-08 22:00 by zhouyuwinner
[考研] 软件工程求调剂22软工296分求调剂,接受跨调 +4 yangchen2017 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:56 by 土木硕士招生
[考研] 307分材料专业求调剂 +12 Hll胡 2026-04-05 12/600 2026-04-08 16:33 by luoyongfeng
[考研] 0703调剂,一志愿天津大学319分 +23 haaaabcd 2026-04-05 26/1300 2026-04-08 16:19 by luoyongfeng
[考研] 计算机408|在校多次国家级竞赛获奖|申请调剂 +4 东山大白鹅 2026-04-05 4/200 2026-04-08 00:18 by chongya
[考研] 301求调剂 +18 121. 2026-04-04 18/900 2026-04-07 17:49 by 蓝云思雨
[考研] 085404 293求调剂 +8 勇远库爱314 2026-04-06 9/450 2026-04-07 13:05 by flydream1314
[考研] 302分求调剂 一志愿安徽大学085601 +12 zyx上岸! 2026-04-04 12/600 2026-04-07 02:09 by BruceLiu320
[考研] 材料调剂 +5 小刘同学吖吖 2026-04-06 5/250 2026-04-06 18:34 by sherry_1901
信息提示
请填处理意见