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wangju87c

银虫 (正式写手)

[求助] 关于培养基中白色不溶性沉淀物 已有3人参与

我有2个项目在做大肠的表达,A项目还行,但是另一个B项目遇上问题了,我做了3次,每次B项目的培养基灭菌后有白色不溶性沉淀,在5L罐里像雪花一样飞,时多时少,直接影响我的产物表达。A项目和B项目的培养基配方有一些差别,蛋白胨和酵母粉的量A项目总量较少(比例1.6:1),B项目总量较多(比例1:1),A项目的培养基中没有硫酸铵,B项目中加了1g/L的硫酸铵。其余营养物质就是磷酸盐和硫酸镁(硫酸镁都是1g/L的浓度)。现在就是A项目的培养基做了近十次,一次也没有不溶性沉淀,B项目每次都有。究竟是什么原因?我把培养基放在小瓶里,发现硫酸铵过量,4g/L反而澄清,还有我换成氯化铵也是澄清,换成无水硫酸钠就有沉淀。硫酸盐在作怪?有没有有经验的朋友给点提示,最好有解决办法,解决不溶性沉淀的问题。
1、消泡剂;2、硫酸根;3、磷酸氢二钾吸潮引入碳酸氢盐;4、铵离子把蛋白质沉淀了;5初始pH的问题
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哥已婚
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

怀疑你的某试剂不纯,会不会含钙盐。按照你的配方,不会有沉淀才对。
2楼2014-08-11 15:18:58
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wzq_ing

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

以前PH是多少?要不调整PH值试试,逐一排除,LZ加油
3楼2014-08-11 16:11:35
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fm707755

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wangju87c: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-08-13 15:58:16
磷酸根和2价金属离子在中性和碱性时很容易形成沉淀,酸性条件是一般不沉淀。
楼主你加硫酸铵过量时,没有沉淀,很有可能是pH比较低所以才不成沉淀。
4楼2014-08-11 21:10:22
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nefu海宁

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by fm707755 at 2014-08-11 21:10:22
磷酸根和2价金属离子在中性和碱性时很容易形成沉淀,酸性条件是一般不沉淀。
楼主你加硫酸铵过量时,没有沉淀,很有可能是pH比较低所以才不成沉淀。

大神,我也遇到相似的问题,培养基一个组分里面有大量的硫酸根(这一组分配置的时候要求PH4),但是该组分加入培养基后,实验需要PH为9,因此每次都出现大量的絮状物,可否有解决的办法?
5楼2014-08-11 21:14:59
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fm707755

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by nefu海宁 at 2014-08-11 21:14:59
大神,我也遇到相似的问题,培养基一个组分里面有大量的硫酸根(这一组分配置的时候要求PH4),但是该组分加入培养基后,实验需要PH为9,因此每次都出现大量的絮状物,可否有解决的办法?...

可能有两种情况
1、pH升高,2价离子与磷酸根等发生沉淀,pH9应该还不会是OH根与2价离子沉淀,能不能考虑减少2价离子或酸根离子?或者用时再加放?
2、pH由酸变碱,会不会是某些物质变性沉淀?
6楼2014-08-12 19:39:08
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nefu海宁

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by fm707755 at 2014-08-12 19:39:08
可能有两种情况
1、pH升高,2价离子与磷酸根等发生沉淀,pH9应该还不会是OH根与2价离子沉淀,能不能考虑减少2价离子或酸根离子?或者用时再加放?
2、pH由酸变碱,会不会是某些物质变性沉淀?...

先谢谢大神的解答:
又重新配了一次还是这样
主要成分就是葡萄糖、氯化钠、磷酸氢二钠、氯化铵,剩下就是各种盐离子,可能引起沉淀的是镁离子,三家铁离子,钙离子,但是吧,这三个的浓度都很低,50X母液的浓度才10g每升
7楼2014-08-12 22:12:09
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zhoutong1030

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by nefu海宁 at 2014-08-12 22:12:09
先谢谢大神的解答:
又重新配了一次还是这样
主要成分就是葡萄糖、氯化钠、磷酸氢二钠、氯化铵,剩下就是各种盐离子,可能引起沉淀的是镁离子,三家铁离子,钙离子,但是吧,这三个的浓度都很低,50X母液的浓度才 ...

请问你的问题解决了么?
我现在也遇到了类似的问题。我在配污水的时候,打算先配微量元素的混合溶液,然后又想直接把K2HPO4也加进去,然后就产生沉淀了,这是咋回事啊?是因为和Ca2+产生沉淀了?
8楼2015-06-01 09:43:04
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wangju87c

银虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zhoutong1030 at 2015-06-01 09:43:04
请问你的问题解决了么?
我现在也遇到了类似的问题。我在配污水的时候,打算先配微量元素的混合溶液,然后又想直接把K2HPO4也加进去,然后就产生沉淀了,这是咋回事啊?是因为和Ca2+产生沉淀了?...

问题已经解决,是磷酸盐的问题,结晶状的磷酸一氢盐遇到高温不但不溶解,反而会变成雪花样的沉淀,必须先在水里溶解再混合
哥已婚
9楼2015-06-01 11:11:07
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源于小姐

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by wangju87c at 2015-06-01 11:11:07
问题已经解决,是磷酸盐的问题,结晶状的磷酸一氢盐遇到高温不但不溶解,反而会变成雪花样的沉淀,必须先在水里溶解再混合...

请问楼主是怎么解决的啊?把其他成分混在一起加水溶解后高压灭菌,之后再加入磷酸盐吗?

我也遇到沉淀的问题,尤其是制成固体培养基时,制出的平板根本长不出细菌...不知该怎么办,求助啊!
10楼2016-03-06 16:13:53
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