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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wangju87c

银虫 (正式写手)

[求助] 关于培养基中白色不溶性沉淀物 已有3人参与

我有2个项目在做大肠的表达，A项目还行，但是另一个B项目遇上问题了，我做了3次，每次B项目的培养基灭菌后有白色不溶性沉淀，在5L罐里像雪花一样飞，时多时少，直接影响我的产物表达。A项目和B项目的培养基配方有一些差别，蛋白胨和酵母粉的量A项目总量较少（比例1.6:1），B项目总量较多（比例1:1），A项目的培养基中没有硫酸铵，B项目中加了1g/L的硫酸铵。其余营养物质就是磷酸盐和硫酸镁（硫酸镁都是1g/L的浓度）。现在就是A项目的培养基做了近十次，一次也没有不溶性沉淀，B项目每次都有。究竟是什么原因？我把培养基放在小瓶里，发现硫酸铵过量，4g/L反而澄清，还有我换成氯化铵也是澄清，换成无水硫酸钠就有沉淀。硫酸盐在作怪？有没有有经验的朋友给点提示，最好有解决办法，解决不溶性沉淀的问题。
1、消泡剂；2、硫酸根；3、磷酸氢二钾吸潮引入碳酸氢盐；4、铵离子把蛋白质沉淀了；5初始pH的问题
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哥已婚
1楼 2014-08-07 14:23:22
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

怀疑你的某试剂不纯，会不会含钙盐。按照你的配方，不会有沉淀才对。
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2楼2014-08-11 15:18:58
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wzq_ing

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

以前PH是多少？要不调整PH值试试，逐一排除，LZ加油
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3楼2014-08-11 16:11:35
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fm707755

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wangju87c: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-08-13 15:58:16
磷酸根和2价金属离子在中性和碱性时很容易形成沉淀，酸性条件是一般不沉淀。
楼主你加硫酸铵过量时，没有沉淀，很有可能是pH比较低所以才不成沉淀。
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4楼2014-08-11 21:10:22
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nefu海宁

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fm707755 at 2014-08-11 21:10:22
磷酸根和2价金属离子在中性和碱性时很容易形成沉淀，酸性条件是一般不沉淀。
楼主你加硫酸铵过量时，没有沉淀，很有可能是pH比较低所以才不成沉淀。

大神，我也遇到相似的问题，培养基一个组分里面有大量的硫酸根（这一组分配置的时候要求PH4），但是该组分加入培养基后，实验需要PH为9，因此每次都出现大量的絮状物，可否有解决的办法？
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5楼2014-08-11 21:14:59
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fm707755

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by nefu海宁 at 2014-08-11 21:14:59
大神，我也遇到相似的问题，培养基一个组分里面有大量的硫酸根（这一组分配置的时候要求PH4），但是该组分加入培养基后，实验需要PH为9，因此每次都出现大量的絮状物，可否有解决的办法？...

可能有两种情况
1、pH升高，2价离子与磷酸根等发生沉淀，pH9应该还不会是OH根与2价离子沉淀，能不能考虑减少2价离子或酸根离子？或者用时再加放？
2、pH由酸变碱，会不会是某些物质变性沉淀？
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6楼2014-08-12 19:39:08
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nefu海宁

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by fm707755 at 2014-08-12 19:39:08
可能有两种情况
1、pH升高，2价离子与磷酸根等发生沉淀，pH9应该还不会是OH根与2价离子沉淀，能不能考虑减少2价离子或酸根离子？或者用时再加放？
2、pH由酸变碱，会不会是某些物质变性沉淀？...

先谢谢大神的解答：
又重新配了一次还是这样
主要成分就是葡萄糖、氯化钠、磷酸氢二钠、氯化铵，剩下就是各种盐离子，可能引起沉淀的是镁离子，三家铁离子，钙离子，但是吧，这三个的浓度都很低，50X母液的浓度才10g每升
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7楼2014-08-12 22:12:09
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zhoutong1030

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by nefu海宁 at 2014-08-12 22:12:09
先谢谢大神的解答：
又重新配了一次还是这样
主要成分就是葡萄糖、氯化钠、磷酸氢二钠、氯化铵，剩下就是各种盐离子，可能引起沉淀的是镁离子，三家铁离子，钙离子，但是吧，这三个的浓度都很低，50X母液的浓度才 ...

请问你的问题解决了么？
我现在也遇到了类似的问题。我在配污水的时候，打算先配微量元素的混合溶液，然后又想直接把K2HPO4也加进去，然后就产生沉淀了，这是咋回事啊？是因为和Ca2+产生沉淀了?
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8楼2015-06-01 09:43:04
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wangju87c

银虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhoutong1030 at 2015-06-01 09:43:04
请问你的问题解决了么？
我现在也遇到了类似的问题。我在配污水的时候，打算先配微量元素的混合溶液，然后又想直接把K2HPO4也加进去，然后就产生沉淀了，这是咋回事啊？是因为和Ca2+产生沉淀了?...

问题已经解决，是磷酸盐的问题，结晶状的磷酸一氢盐遇到高温不但不溶解，反而会变成雪花样的沉淀，必须先在水里溶解再混合
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哥已婚
9楼2015-06-01 11:11:07
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源于小姐

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by wangju87c at 2015-06-01 11:11:07
问题已经解决，是磷酸盐的问题，结晶状的磷酸一氢盐遇到高温不但不溶解，反而会变成雪花样的沉淀，必须先在水里溶解再混合...

请问楼主是怎么解决的啊？把其他成分混在一起加水溶解后高压灭菌，之后再加入磷酸盐吗？

我也遇到沉淀的问题，尤其是制成固体培养基时，制出的平板根本长不出细菌...不知该怎么办，求助啊!
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10楼2016-03-06 16:13:53
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