| 查看: 1137 | 回复: 7 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
请帮忙看看这个PCR后电泳结果，谢谢！ 已有1人参与
|
||
|
质粒大小>7kbp。 目的基因：772bp。 引物：Tm：57°C。 按质粒浓度设了4个梯度，每个梯度分3管，同时进行PCR。 PCR反应条件： 第一阶段：94°C，2min 第二阶段：94°C，30s；52°C，30s；72°C，47s；30个循环 第三阶段：72°C，5min 加样： 孔1：Marker D2000。孔2：产物加到孔外边了。 孔3、4、5：高浓度质粒。 孔6、7、8：中高浓度质粒。 孔9、10、11：中低浓度质粒。 孔12、13、14：低浓度质粒。 孔15：未加样。 结果如图： 图一：电泳20min时拍的。 图二：之后又跑了5min。 问题：我们得到的条带是目的基因还是质粒？为什么同样浓度质粒，三管PCR后有的出现条带，有的没有条带？下一步该怎么做？ 希望得到高手指点。 |
回复此楼» 本帖附件资源列表
-
欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : pcr2014-07-29_13_时_44_分.tif
- 附件 2 : PCR22014-07-29_14_时_01_分.tif
2014-07-29 21:35:29, 18.55 M
2014-07-29 21:35:54, 14.65 M
» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有177人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
5楼2014-07-31 23:27:48
kuaile5420
专家顾问 (著名写手)
- 应助: 72 (初中生)
- 贵宾: 0.232
- 金币: 10312.4
- 散金: 124
- 红花: 15
- 帖子: 1068
- 在线: 221.8小时
- 虫号: 1836826
- 注册: 2012-05-27
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
- 管辖: 生物医药区
2楼2014-07-30 16:03:38
3楼2014-07-30 20:28:43
kuaile5420
专家顾问 (著名写手)
- 应助: 72 (初中生)
- 贵宾: 0.232
- 金币: 10312.4
- 散金: 124
- 红花: 15
- 帖子: 1068
- 在线: 221.8小时
- 虫号: 1836826
- 注册: 2012-05-27
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
- 管辖: 生物医药区
【答案】应助回帖
★ ★ ★
merry2004120: 金币+1 2014-07-31 23:35:33
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-01 10:31:57
merry2004120: 金币+1 2014-07-31 23:35:33
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-01 10:31:57
| 嗯，加入了原质粒，可以看出跑出来的条带不是质粒条带而是PCR产生的条带，但是不是目的基因的条带：我推测由两个原因，其一，可能是你的预变性时间（即你的第一阶段）时间太短，只有两分钟，导致变性不完全，影响了后面的PCR，适当延长一下预变性的时间，eg，5min；其二，可能是引物的问题，引物设计存在问题导致没有P出自己想要的目的基因，而是P出了别的基因，这个就要重新设计引物了。还有一个问题就是有些泳道根本没有条带：推测原因如下，可能是没有提取到质粒，提取之后你做鉴定了吗？是鉴定之后跑的PCR吗？ |
4楼2014-07-30 21:06:40