应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请帮忙看看这个PCR后电泳结果，谢谢！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1190  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

merry2004120

银虫 (小有名气)

[求助] 请帮忙看看这个PCR后电泳结果，谢谢！ 已有1人参与

质粒大小>7kbp。
目的基因：772bp。
引物：Tm：57°C。
按质粒浓度设了4个梯度，每个梯度分3管，同时进行PCR。

PCR反应条件：
第一阶段：94°C，2min
第二阶段：94°C，30s；52°C，30s；72°C，47s；30个循环
第三阶段：72°C，5min

加样：
孔1：Marker D2000。孔2：产物加到孔外边了。
孔3、4、5：高浓度质粒。
孔6、7、8：中高浓度质粒。
孔9、10、11：中低浓度质粒。
孔12、13、14：低浓度质粒。
孔15：未加样。

结果如图：
图一：电泳20min时拍的。
图二：之后又跑了5min。

问题：我们得到的条带是目的基因还是质粒？为什么同样浓度质粒，三管PCR后有的出现条带，有的没有条带？下一步该怎么做？

希望得到高手指点。
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : pcr2014-07-29_13_时_44_分.tif
    • 2014-07-29 21:35:29, 18.55 M
  • 附件 2 : PCR22014-07-29_14_时_01_分.tif
    • 2014-07-29 21:35:54, 14.65 M

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-07-29 21:58:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

merry2004120

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kuaile5420 at 2014-07-30 16:03:38
你好，看你的电泳结果，根本没有P出来目的片段啊？显示的条带都是大于2000bp的，应该是质粒；是不是你的质粒浓度太高，不利于PCR尝试着做个稀释之后再做一下PCR。

今天又做了一次电泳，左边第一个亮带加的是原始质粒，右边的是Marker，中间所加样品顺序与昨天相同。
感觉P出来的和质粒不在同一水平。

请高手指点！
请帮忙看看这个PCR后电泳结果，谢谢！
质粒+PCR-2014-7-30.jpg
赞一下 回复此楼
3楼2014-07-30 20:28:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

kuaile5420

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
merry2004120: 金币+1 2014-07-30 20:29:40
你好，看你的电泳结果，根本没有P出来目的片段啊？显示的条带都是大于2000bp的，应该是质粒；是不是你的质粒浓度太高，不利于PCR尝试着做个稀释之后再做一下PCR。
赞一下 回复此楼
坚持到底就是胜利！
2楼2014-07-30 16:03:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kuaile5420

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
merry2004120: 金币+1 2014-07-31 23:35:33
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-01 10:31:57
嗯，加入了原质粒，可以看出跑出来的条带不是质粒条带而是PCR产生的条带，但是不是目的基因的条带：我推测由两个原因，其一，可能是你的预变性时间（即你的第一阶段）时间太短，只有两分钟，导致变性不完全，影响了后面的PCR，适当延长一下预变性的时间，eg，5min；其二，可能是引物的问题，引物设计存在问题导致没有P出自己想要的目的基因，而是P出了别的基因，这个就要重新设计引物了。还有一个问题就是有些泳道根本没有条带：推测原因如下，可能是没有提取到质粒，提取之后你做鉴定了吗？是鉴定之后跑的PCR吗？
赞一下 回复此楼
坚持到底就是胜利！
4楼2014-07-30 21:06:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

merry2004120

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by kuaile5420 at 2014-07-30 21:06:40
嗯，加入了原质粒，可以看出跑出来的条带不是质粒条带而是PCR产生的条带，但是不是目的基因的条带：我推测由两个原因，其一，可能是你的预变性时间（即你的第一阶段）时间太短，只有两分钟，导致变性不完全，影响了 ...

请问：您所指的鉴定是分光光度计吗？P后电泳不就是为了鉴定吗？
请指教！
赞一下 回复此楼
5楼2014-07-31 23:27:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 南京大学化学调剂 +10 景随风 2026-03-29 15/750 2026-03-30 11:21 by limeifeng
[考研] 334分 一志愿武理 材料求调剂 +12 李李不服输 2026-03-26 12/600 2026-03-30 10:33 by 我是小康
[考研] 348求调剂 +6 小懒虫不懒了 2026-03-28 6/300 2026-03-30 10:29 by Evan_Liu
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +11 辰沐5211314 2026-03-26 11/550 2026-03-30 09:00 by 无际的草原
[考研] 085600 286分 材料求调剂 +10 麻辣鱿鱼 2026-03-27 11/550 2026-03-29 21:52 by nanaliuyun
[考研] 各位老师好，我的一志愿为北京科技大学085601材料专硕 +9 Koxui 2026-03-28 9/450 2026-03-29 20:43 by 无际的草原
[考研] 环境工程 085701，267求调剂 +6 minht 2026-03-29 6/300 2026-03-29 16:21 by 学员8dgXkO
[考研] 本科双非材料，跨考一志愿华电085801电气，283求调剂，任何专业都可以 +6 芝士雪baoo 2026-03-28 8/400 2026-03-29 08:16 by 松花缸1201
[考研] 11408软件工程求调剂 +3 Qiu学ing 2026-03-28 3/150 2026-03-28 21:50 by zhq0425
[考研] 求调剂 +7 争取九点睡 2026-03-28 8/400 2026-03-28 21:07 by 争取九点睡
[考研] 291求调剂 +15 hhhhxn.. 2026-03-23 21/1050 2026-03-28 11:26 by self2008
[考研] 085405 考的11408求各位老师带走 +3 Qiu学ing 2026-03-28 3/150 2026-03-28 09:19 by 乐呵呵的追梦人
[考研] 331环境科学与工程求调剂 +3 熠然好运气 2026-03-27 3/150 2026-03-28 04:11 by fmesaito
[考研] 一志愿南师大0703化学 275求调剂 +4 Ripcord上岸 2026-03-27 4/200 2026-03-27 17:00 by zhyzzh
[考研] 333求调剂 +3 question挽风 2026-03-23 3/150 2026-03-27 11:29 by 不吃魚的貓
[考研] 材料求调剂 +5 .m.. 2026-03-25 5/250 2026-03-27 11:08 by 不吃魚的貓
[考研] 351求调剂 +4 麦克阿磊 2026-03-24 4/200 2026-03-27 00:32 by wxiongid
[考研] 中国科学院深圳先进技术研究院-光纤传感课题组招生-中国科学院大学、深圳理工大学联培 +5 YangTyu1 2026-03-26 5/250 2026-03-26 18:27 by 猫咪猫咪呀
[考研] 材料科学与工程 317求调剂 +4 JKSOIID 2026-03-26 4/200 2026-03-26 15:58 by 不吃魚的貓
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭