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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 蛋白质过高效液相色谱的相关问题
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guyifei2007

木虫 (小有名气)

[交流] 蛋白质过高效液相色谱的相关问题

最近小弟在做组蛋白的含量分析，用的是0.1%TFA的水和0.1%TFA的乙腈做为流动相，柱子是C18柱，检测波长210或278，但是就是没有出峰，求这方面得大神给予几个可行的方案或是流动相的比例
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1楼 2014-07-26 09:38:25
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chenzhengyi

木虫 (小有名气)
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suruiqin: 金币+2, 感谢参与，欢迎常来分析版交流~ 2014-07-29 11:27:38
要用专用柱子，例如：Aeris WIDEPORE XB-C18色谱柱(4.6 mmi.d ×250 mm，粒径3.6 μm)；而且检测波长一般是214,254；另外你要给出流速和梯度啊！
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有阳光的地方就会有阴影
2楼2014-07-26 11:49:32
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Dionysius

木虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by guyifei2007 at 2014-07-30 22:31:47
我看的文献用的C18也有C4和C8的...

你要看一下你的柱子孔径，蛋白最好选用300Å的。分子量10K左右的小蛋白可以用C18，分子量大的蛋白还是用C4或者C8吧
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10楼2014-07-31 08:36:49
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guyifei2007

木虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by chenzhengyi at 2014-07-26 11:49:32
要用专用柱子，例如：Aeris WIDEPORE XB-C18色谱柱(4.6 mmi.d ×250 mm，粒径3.6 μm)；而且检测波长一般是214,254；另外你要给出流速和梯度啊！

我没有用专门的柱子流速我用的0.5ml/min和1ml/min，现在我还处于摸索条件阶段，都是根据相关文献来的，但是我一上高效液相色谱就只能看到基线，别的什么多不能看到，所以现在我仅想问问那些做过蛋白质高效液相色谱的，他们做实验的一般条件，谢谢拉。
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3楼2014-07-26 14:52:09
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chenzhengyi

木虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by guyifei2007 at 2014-07-26 14:52:09
我没有用专门的柱子流速我用的0.5ml/min和1ml/min，现在我还处于摸索条件阶段，都是根据相关文献来的，但是我一上高效液相色谱就只能看到基线，别的什么多不能看到，所以现在我仅想问问那些做过蛋白质高效液相色谱 ...

很简单的，流动相B(0.1%TFA乙腈)从5%-90%，时间40min，你告诉我一下你的柱子。型号，长度，填充物信息等。估计你的柱子粒径是不是太小了？不出峰？或者你试着加大样品浓度或者加大进样量
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4楼2014-07-29 10:52:14
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雨梦无声

金虫 (著名写手)
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4楼: Originally posted by chenzhengyi at 2014-07-29 10:52:14
很简单的，流动相B(0.1%TFA乙腈)从5%-90%，时间40min，你告诉我一下你的柱子。型号，长度，填充物信息等。估计你的柱子粒径是不是太小了？不出峰？或者你试着加大样品浓度或者加大进样量...

师兄，不要教坏同学，C18绝对不允许上蛋白，上一根死一根。
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5楼2014-07-29 17:32:05
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Dionysius

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
蛋白分析还是用C4的柱子吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2014-07-29 22:52:12
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guyifei2007

木虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by chenzhengyi at 2014-07-29 10:52:14
很简单的，流动相B(0.1%TFA乙腈)从5%-90%，时间40min，你告诉我一下你的柱子。型号，长度，填充物信息等。估计你的柱子粒径是不是太小了？不出峰？或者你试着加大样品浓度或者加大进样量...

现在不知道为什么我的样品第一次跑出峰但是以同样的条件跑第二次就不出峰
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7楼2014-07-30 22:30:24
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guyifei2007

木虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by 雨梦无声 at 2014-07-29 17:32:05
师兄，不要教坏同学，C18绝对不允许上蛋白，上一根死一根。...

文献上也有用C18的
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8楼2014-07-30 22:30:54
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guyifei2007

木虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by Dionysius at 2014-07-29 22:52:12
蛋白分析还是用C4的柱子吧

我看的文献用的C18也有C4和C8的
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9楼2014-07-30 22:31:47
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