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guyifei2007

木虫 (小有名气)

[交流] 蛋白质过高效液相色谱的相关问题

最近小弟在做组蛋白的含量分析,用的是0.1%TFA的水和0.1%TFA的乙腈做为流动相,柱子是C18柱,检测波长210或278,但是就是没有出峰,求这方面得大神给予几个可行的方案或是流动相的比例
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guyifei2007

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 雨梦无声 at 2014-07-29 17:32:05
师兄,不要教坏同学,C18绝对不允许上蛋白,上一根死一根。...

文献上也有用C18的
8楼2014-07-30 22:30:54
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chenzhengyi

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
suruiqin: 金币+2, 感谢参与,欢迎常来分析版交流~ 2014-07-29 11:27:38
要用专用柱子,例如:Aeris WIDEPORE XB-C18色谱柱(4.6 mmi.d ×250 mm,粒径3.6 μm);而且检测波长一般是214,254;另外你要给出流速和梯度啊!
有阳光的地方就会有阴影
2楼2014-07-26 11:49:32
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guyifei2007

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chenzhengyi at 2014-07-26 11:49:32
要用专用柱子,例如:Aeris WIDEPORE XB-C18色谱柱(4.6 mmi.d ×250 mm,粒径3.6 μm);而且检测波长一般是214,254;另外你要给出流速和梯度啊!

我没有用专门的柱子流速我用的0.5ml/min和1ml/min,现在我还处于摸索条件阶段,都是根据相关文献来的,但是我一上高效液相色谱就只能看到基线,别的什么多不能看到,所以现在我仅想问问那些做过蛋白质高效液相色谱的,他们做实验的一般条件,谢谢拉。
3楼2014-07-26 14:52:09
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chenzhengyi

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by guyifei2007 at 2014-07-26 14:52:09
我没有用专门的柱子流速我用的0.5ml/min和1ml/min,现在我还处于摸索条件阶段,都是根据相关文献来的,但是我一上高效液相色谱就只能看到基线,别的什么多不能看到,所以现在我仅想问问那些做过蛋白质高效液相色谱 ...

很简单的,流动相B(0.1%TFA乙腈)从5%-90%,时间40min,你告诉我一下你的柱子。型号,长度,填充物信息等。估计你的柱子粒径是不是太小了?不出峰?或者你试着加大样品浓度或者加大进样量
有阳光的地方就会有阴影
4楼2014-07-29 10:52:14
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