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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 感受态细胞的制备
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呀薯条

金虫 (小有名气)

[求助] 感受态细胞的制备 已有6人参与

第一次做DNA克隆与表达。想采用氯化钙法感受态细胞。
想制备高效的感受态细胞，氯化钙的级别有要求吗？因为没有液氮速冻，打算直接分装后先放在冰上，然后直接放入-50度可以吗？
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1楼 2014-07-24 19:59:37
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-24 21:23:15
呀薯条: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-07-26 09:25:00
我一般都从国内试剂公司买的氯化钙，高温灭菌后直接放4度都没问题，制备感受态的时候从冰箱里拿出来放冰盒里，转化效率肯定不如商品的，但是阳性对照照样是满版的转化子。
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大家相互帮助哈
2楼2014-07-24 20:22:57
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-24 21:23:27
呀薯条: 金币+1, ★有帮助 2014-07-26 09:25:11
菌株与氯化钙都很重要，水，耗材要很干净，细节处理好了，效率就没问题了

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2014-07-24 21:05:54
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zhong601

禁虫 (初入文坛)
★
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条: 金币+1, ★有帮助 2014-07-26 09:25:28
本帖内容被屏蔽
4楼2014-07-25 17:34:16
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xiaobai1999

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-28 16:24:40
呀薯条: 金币+1, ★有帮助 2014-07-29 19:52:33
防杂菌，防污染，这两个比较重要。另外建DNA文库对转化的要求比较高，不建库的话随意啦。
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5楼2014-07-28 16:17:12
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yangmin0721

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by zhong601 at 2014-07-25 17:34:16
分装时注意操作规范及时间把握！

那个时间把握怎么讲呢？最近在做老是污染，脑袋都大了……
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我将一如既往的相信自己，相信未来~！
6楼2014-08-01 17:12:46
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呀薯条

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yangmin0721 at 2014-08-01 17:12:46
那个时间把握怎么讲呢？最近在做老是污染，脑袋都大了……...

按照要求进行冰浴。冰浴后快速分装吧，我觉得。上次新做了一批，希望效率会高点
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7楼2014-08-08 09:43:58
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nlbtr

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by yangmin0721 at 2014-08-01 17:12:46
那个时间把握怎么讲呢？最近在做老是污染，脑袋都大了……...

你是什么细胞，知道是什么污染吗？
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8楼2014-08-26 11:17:15
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