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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR目的条带太弱 并无非特异性条带 怎样改进可以使目的产物的量加大
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ouis歪歪

铜虫 (小有名气)
你这真的不是没有目的条带吗
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31楼2014-07-17 12:14:54
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董庄青年

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
29楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-17 11:47:00
DpnI只能处理掉原始模板，200ng37度处理2h足够了。你确定你想要两条引物相连的转化子？...

弱弱的问一下两条引物相连的转化子是什么
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32楼2014-07-17 12:30:12
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董庄青年

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
30楼: Originally posted by Deluger at 2014-07-17 12:10:11
切胶回收，二次PCR

正在尝试   谢谢
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33楼2014-07-17 12:32:03
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董庄青年

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
31楼: Originally posted by ouis歪歪 at 2014-07-17 12:14:54
你这真的不是没有目的条带吗

？？？？？
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34楼2014-07-17 12:34:36
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-18 10:29:22
看你的引物，正反向是互补的，是做定点突变吗？如果做定点突变的话，给你推荐一个在线设计软件，我做过多次点突变，用这个软件设计的引物扩的都很好。QuikChange Primer Design。链接：https://www.genomics.agilent.com/primerDesignProgram.jsp
另外，如果做定点突变的话，需要采用保真性高的KOD或者Pfu酶，Taq酶做定点突变不行的
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rainwater
35楼2014-07-17 16:36:57
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luwei13566

木虫 (正式写手)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-18 10:29:33
引用回帖:
32楼: Originally posted by 董庄青年 at 2014-07-17 12:30:12
弱弱的问一下两条引物相连的转化子是什么...

就是你的一部分转化子带有的质粒上带有连续两个引物序列。
还有纠正一下上面说的，DpnI能把所有的模板给消除掉，这个PCR里真正能正确转化的只有双链缺刻的环状DNA，跑电泳是看不到的，因此你扩完直接转化就好，不用管条那带的亮弱
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大家相互帮助哈
36楼2014-07-17 22:27:44
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ykluuniu

金虫 (小有名气)
试试把退货温度降低，好运
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37楼2014-07-17 22:48:30
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未婚

金虫 (正式写手)

分子小生
二聚体的亮度好高啊，可不可以再设计引物再跑啊，为什么你只×20呢，把循环数调到34看一下呢！

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You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
38楼2014-07-18 00:50:42
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未婚

金虫 (正式写手)

分子小生
看到你的引物了，你是做定点突变么？那你跑的出条带还不好？

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You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
39楼2014-07-18 00:57:31
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未婚

金虫 (正式写手)

分子小生
引用回帖:
4楼: Originally posted by 董庄青年 at 2014-07-16 14:14:47
引物1：5’-GGAGTTGATGGTGCAGGAAATGAATTG-3’
引物2：5’-CAATTCATTTCCTGCACCATCAACTCC-3’...

是做定点突变的吧？

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You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
40楼2014-07-18 00:58:45
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