24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 8723  |  回复: 51

ouis歪歪

铜虫 (小有名气)

你这真的不是没有目的条带吗
31楼2014-07-17 12:14:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董庄青年

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
29楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-17 11:47:00
DpnI只能处理掉原始模板,200ng37度处理2h足够了。你确定你想要两条引物相连的转化子?...

弱弱的问一下两条引物相连的转化子是什么
32楼2014-07-17 12:30:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董庄青年

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
30楼: Originally posted by Deluger at 2014-07-17 12:10:11
切胶回收,二次PCR

正在尝试   谢谢
33楼2014-07-17 12:32:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董庄青年

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
31楼: Originally posted by ouis歪歪 at 2014-07-17 12:14:54
你这真的不是没有目的条带吗

?????
34楼2014-07-17 12:34:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-18 10:29:22
看你的引物,正反向是互补的,是做定点突变吗?如果做定点突变的话,给你推荐一个在线设计软件,我做过多次点突变,用这个软件设计的引物扩的都很好。QuikChange Primer Design。链接:https://www.genomics.agilent.com/primerDesignProgram.jsp
另外,如果做定点突变的话,需要采用保真性高的KOD或者Pfu酶,Taq酶做定点突变不行的
rainwater
35楼2014-07-17 16:36:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-18 10:29:33
引用回帖:
32楼: Originally posted by 董庄青年 at 2014-07-17 12:30:12
弱弱的问一下两条引物相连的转化子是什么...

就是你的一部分转化子带有的质粒上带有连续两个引物序列。
还有纠正一下上面说的,DpnI能把所有的模板给消除掉,这个PCR里真正能正确转化的只有双链缺刻的环状DNA,跑电泳是看不到的,因此你扩完直接转化就好,不用管条那带的亮弱
大家相互帮助哈
36楼2014-07-17 22:27:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ykluuniu

金虫 (小有名气)

试试把退货温度降低,好运
37楼2014-07-17 22:48:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

未婚

金虫 (正式写手)

分子小生

二聚体的亮度好高啊,可不可以再设计引物再跑啊,为什么你只×20呢,把循环数调到34看一下呢!

[ 发自小木虫客户端 ]
You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
38楼2014-07-18 00:50:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

未婚

金虫 (正式写手)

分子小生

看到你的引物了,你是做定点突变么?那你跑的出条带还不好?

[ 发自小木虫客户端 ]
You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
39楼2014-07-18 00:57:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

未婚

金虫 (正式写手)

分子小生

引用回帖:
4楼: Originally posted by 董庄青年 at 2014-07-16 14:14:47
引物1:5’-GGAGTTGATGGTGCAGGAAATGAATTG-3’
引物2:5’-CAATTCATTTCCTGCACCATCAACTCC-3’...

是做定点突变的吧?

[ 发自小木虫客户端 ]
You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
40楼2014-07-18 00:58:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 董庄青年 的主题更新
信息提示
请填处理意见