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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白提取相关问题
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于德斌

金虫 (正式写手)

[求助] 蛋白提取相关问题 已有2人参与

我昨天做了从小鸡脾脏中提取总蛋白的实验，提取过程中需要4度离心，由于离心机坏了等了一个多小时，样品放在-20冰箱内了。过了一个多小时才离心测OD。最后算出我测得六组样的蛋白浓度在6.6~7.8mg/ml之间不等。这个浓度可以进行后续的western实验吗
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知识就是力量
1楼 2014-07-03 14:24:43
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yzj926521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-04 09:48:55
gyesang: 应助指数+1 2014-07-04 23:08:51
可以用于WB，只是在变性蛋白时需要依据各个样品的浓度进行定量加不同的体积量而已，以减少上样量误差
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2楼2014-07-04 08:04:34
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于德斌

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yzj926521 at 2014-07-04 08:04:34
可以用于WB，只是在变性蛋白时需要依据各个样品的浓度进行定量加不同的体积量而已，以减少上样量误差

蛋白上样前要将蛋白放到水肿煮沸使之变性，我是把我要所上样的蛋白的量变性还是把所有的样都变性。另外先变性还是先加上样缓冲液。这些我一直没弄明白
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知识就是力量
3楼2014-07-04 08:39:05
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王小七wq

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-04 23:09:03
可以的，组织－20度放短时间降解很少，这个浓度可以做wb
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4楼2014-07-04 18:50:18
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yzj926521

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 于德斌 at 2014-07-04 08:39:05
蛋白上样前要将蛋白放到水肿煮沸使之变性，我是把我要所上样的蛋白的量变性还是把所有的样都变性。另外先变性还是先加上样缓冲液。这些我一直没弄明白...

每次上样多少体积的就变性多少体积，我们做的是loading buffer 和所上样的蛋白量加在一起，之后变性
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5楼2014-07-05 07:51:41
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yingxiaoying

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 于德斌 at 2014-07-04 08:39:05
蛋白上样前要将蛋白放到水肿煮沸使之变性，我是把我要所上样的蛋白的量变性还是把所有的样都变性。另外先变性还是先加上样缓冲液。这些我一直没弄明白...

同求解
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6楼2014-10-09 21:57:33
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