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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取
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Renjingyu

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取 已有10人参与

从平板上挑斑摇菌竟然提不出质粒是怎么回事？
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即将加入研究生的大军，迷茫！
1楼 2014-06-28 10:37:29
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
27楼: Originally posted by hajierlove at 2014-07-15 23:43:03
楼主，我的是菌液pcr有目的条带，也有杂带，但是杂带比较暗，质粒的浓度好低，20-30ng正常吗？酶切的时候没有目的产物...

菌液pcr有目的条带不一定就是阳性克隆，也可能是假阳性，做菌落PCR的时候，最好不好全用你基因的引物，可以配合载体上的一条引物做，这样可以消除假阳性
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
30楼2014-07-16 13:00:44
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shaohe2013

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
同样表示好惊讶，确定培养基没问题吗？

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-06-28 10:40:38
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Renjingyu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shaohe2013 at 2014-06-28 10:40:38
同样表示好惊讶，确定培养基没问题吗？

转化--涂板--菌p--摇菌 其中菌落pcr验证正确，就是摇不出菌，有没有可能我的转化做的就不对？我确定培养基是没问题的
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即将加入研究生的大军，迷茫！
3楼2014-06-28 10:48:11
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-06-28 17:01:56
1、你到底是菌要摇出来没有？如果没有，要考虑你的培养基，还有你是否有挑到克隆，以及你摇菌的转速和时间
2、抽不出质粒的话，检查一下你所用的试剂是否有问题，自己的操作是否有出现错误
3、既然菌液PCR都出来了，那么可以肯定基本是克隆上了，除非你的引物不特异，出现了假阳性
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
4楼2014-06-28 13:02:40
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