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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取
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Renjingyu

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取 已有10人参与

从平板上挑斑摇菌竟然提不出质粒是怎么回事？
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即将加入研究生的大军，迷茫！
1楼 2014-06-28 10:37:29
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

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gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-06-28 17:01:56
1、你到底是菌要摇出来没有？如果没有，要考虑你的培养基，还有你是否有挑到克隆，以及你摇菌的转速和时间
2、抽不出质粒的话，检查一下你所用的试剂是否有问题，自己的操作是否有出现错误
3、既然菌液PCR都出来了，那么可以肯定基本是克隆上了，除非你的引物不特异，出现了假阳性
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
4楼2014-06-28 13:02:40
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-29 17:31:28
引用回帖:
5楼: Originally posted by Renjingyu at 2014-06-28 14:54:43
没有摇出来菌，培养基也是没有问题的，因为别人也有在用，都没有问题！...

那应该不会是噬菌体污染吧？试着查一下该菌生长的最适温度，时间，转速等，改变一下摇菌的方法
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6楼2014-06-28 17:30:13
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
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9楼: Originally posted by Renjingyu at 2014-06-28 22:12:53
一直用的都是大肠杆菌，第一次出现这种情况
...

可以考虑噬菌体污染的可能性
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12楼2014-06-29 19:03:43
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
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27楼: Originally posted by hajierlove at 2014-07-15 23:43:03
楼主，我的是菌液pcr有目的条带，也有杂带，但是杂带比较暗，质粒的浓度好低，20-30ng正常吗？酶切的时候没有目的产物...

质粒浓度太低，建议精抽后酶切
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28楼2014-07-16 08:50:54
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
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33楼: Originally posted by hajierlove at 2014-07-17 20:10:17
楼主，打算精抽，1.5ml的离心管摇不起来菌，现在改换试管了，楼主，我又做了连接，转化，发现平板上干干静静，都没有长，这次我加了氨苄，卡纳，由于之前平板上长得菌落太多。怎么回事，？...

我不是楼主。。。。
你讲的很乱，麻烦讲清楚一点以便给你解答
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34楼2014-07-18 10:14:40
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
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35楼: Originally posted by hajierlove at 2014-07-18 12:44:39
第三次被人家说表达有问题，我真的需要锻炼啦。
主要是，连接后图板，平板中加了氨苄，卡纳，几个板都没有长。不清楚是什么原因...

这个抗生素是不能乱加的，根据载体来加，你确定自己没有加错？
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36楼2014-07-18 16:29:02
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