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Renjingyu

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取 已有10人参与

从平板上挑斑摇菌竟然提不出质粒是怎么回事?
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即将加入研究生的大军,迷茫!
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-06-28 13:02:40
1、你到底是菌要摇出来没有?如果没有,要考虑你的培养基,还有你是否有挑到克隆,以及你摇菌的转速和时间
2、抽不出质粒的话,检查一下你所用的试剂是否有问题,自己的操作是否有出现错误
3、既然菌液PCR都出来了 ...

楼主,我的是菌液pcr有目的条带,也有杂带,但是杂带比较暗,质粒的浓度好低,20-30ng正常吗?酶切的时候没有目的产物
踏实
27楼2014-07-15 23:43:03
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shaohe2013

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
同样表示好惊讶,确定培养基没问题吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-06-28 10:40:38
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Renjingyu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shaohe2013 at 2014-06-28 10:40:38
同样表示好惊讶,确定培养基没问题吗?

转化--涂板--菌p--摇菌 其中菌落pcr验证正确,就是摇不出菌,有没有可能我的转化做的就不对?我确定培养基是没问题的
即将加入研究生的大军,迷茫!
3楼2014-06-28 10:48:11
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2014-06-28 17:01:56
1、你到底是菌要摇出来没有?如果没有,要考虑你的培养基,还有你是否有挑到克隆,以及你摇菌的转速和时间
2、抽不出质粒的话,检查一下你所用的试剂是否有问题,自己的操作是否有出现错误
3、既然菌液PCR都出来了,那么可以肯定基本是克隆上了,除非你的引物不特异,出现了假阳性
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
4楼2014-06-28 13:02:40
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