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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取
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Renjingyu

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取 已有10人参与

从平板上挑斑摇菌竟然提不出质粒是怎么回事？
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即将加入研究生的大军，迷茫！
1楼 2014-06-28 10:37:29
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shaohe2013

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
同样表示好惊讶，确定培养基没问题吗？

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-06-28 10:40:38
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Renjingyu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shaohe2013 at 2014-06-28 10:40:38
同样表示好惊讶，确定培养基没问题吗？

转化--涂板--菌p--摇菌 其中菌落pcr验证正确，就是摇不出菌，有没有可能我的转化做的就不对？我确定培养基是没问题的
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即将加入研究生的大军，迷茫！
3楼2014-06-28 10:48:11
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-06-28 17:01:56
1、你到底是菌要摇出来没有？如果没有，要考虑你的培养基，还有你是否有挑到克隆，以及你摇菌的转速和时间
2、抽不出质粒的话，检查一下你所用的试剂是否有问题，自己的操作是否有出现错误
3、既然菌液PCR都出来了，那么可以肯定基本是克隆上了，除非你的引物不特异，出现了假阳性
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
4楼2014-06-28 13:02:40
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Renjingyu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-06-28 13:02:40
1、你到底是菌要摇出来没有？如果没有，要考虑你的培养基，还有你是否有挑到克隆，以及你摇菌的转速和时间
2、抽不出质粒的话，检查一下你所用的试剂是否有问题，自己的操作是否有出现错误
3、既然菌液PCR都出来了 ...

没有摇出来菌，培养基也是没有问题的，因为别人也有在用，都没有问题！
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即将加入研究生的大军，迷茫！
5楼2014-06-28 14:54:43
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-29 17:31:28
引用回帖:
5楼: Originally posted by Renjingyu at 2014-06-28 14:54:43
没有摇出来菌，培养基也是没有问题的，因为别人也有在用，都没有问题！...

那应该不会是噬菌体污染吧？试着查一下该菌生长的最适温度，时间，转速等，改变一下摇菌的方法
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
6楼2014-06-28 17:30:13
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长相思

银虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-28 22:59:14
亲哥！是不是培养基里面加了抗生素罗！别人用他培养的不同的细菌当然可以啊。你培养的细菌没这个抗生素抗性怎么长。你检查下吧。或者你加错抗生素了。
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未来很美好
7楼2014-06-28 21:33:52
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Renjingyu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 长相思 at 2014-06-28 21:33:52
亲哥！是不是培养基里面加了抗生素罗！别人用他培养的不同的细菌当然可以啊。你培养的细菌没这个抗生素抗性怎么长。你检查下吧。或者你加错抗生素了。

用的都是大肠杆菌

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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即将加入研究生的大军，迷茫！
8楼2014-06-28 22:11:22
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Renjingyu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-06-28 17:30:13
那应该不会是噬菌体污染吧？试着查一下该菌生长的最适温度，时间，转速等，改变一下摇菌的方法...

一直用的都是大肠杆菌，第一次出现这种情况

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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即将加入研究生的大军，迷茫！
9楼2014-06-28 22:12:53
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
★
Renjingyu(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-07-15 20:49:58
菌P条带亮度怎么样？高亮吗？

[ 发自小木虫客户端 ]
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天道酬勤
10楼2014-06-29 00:16:29
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