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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取
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Renjingyu

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取 已有10人参与

从平板上挑斑摇菌竟然提不出质粒是怎么回事？
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即将加入研究生的大军，迷茫！
1楼 2014-06-28 10:37:29
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gyesang

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Renjingyu(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-16 08:58:55
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3楼: Originally posted by Renjingyu at 2014-06-28 10:48:11
转化--涂板--菌p--摇菌 其中菌落pcr验证正确，就是摇不出菌，有没有可能我的转化做的就不对？我确定培养基是没问题的...

“转化--涂板--菌p--摇菌 其中菌落pcr验证正确“
如何断定你的菌落PCR正确，也就是克隆是阳性的，你是如何排除假阳性的，如果菌落PCR做的不好的话，很可能就会出现假阳性
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24楼2014-07-15 20:49:26
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gyesang

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17楼: Originally posted by Renjingyu at 2014-06-30 10:43:39
不是很亮，但挑了5个斑都有很浅的条带...

不是很亮，挑了5个斑都有很浅的条带，这说明你的菌落都是假阳性，你摇菌后抽不到质粒也就很正常了
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
25楼2014-07-15 20:51:01
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27楼: Originally posted by hajierlove at 2014-07-15 23:43:03
楼主，我的是菌液pcr有目的条带，也有杂带，但是杂带比较暗，质粒的浓度好低，20-30ng正常吗？酶切的时候没有目的产物...

菌液pcr有目的条带不一定就是阳性克隆，也可能是假阳性，做菌落PCR的时候，最好不好全用你基因的引物，可以配合载体上的一条引物做，这样可以消除假阳性
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30楼2014-07-16 13:00:44
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