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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 两段ＤＮＡ链如何合成一条链？
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带锁的季节

银虫 (小有名气)

[求助] 两段ＤＮＡ链如何合成一条链？ 已有1人参与

转录是以ＤＮＡ有义链为模板进行转录的，可有义链不会只在一条链上，我现在想把两段ＤＮＡ链（各自都带ＡＴＧ）合为一条且起始密码子能正确翻译成Ｍ，那么这两条应该怎样连接？？？是ＡＴＧ链连着ＡＴＧ还是ＡＴＧ连着ＴＡＣ？？？？？？
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1楼 2014-06-25 10:19:51
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gyesang

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带锁的季节(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:31:26
把你这个问题简化为：
你现在有DNA A片段和B片段，你现在想把A和B fusion起来，最简单的方法就是设计引物做Overlap PCR，具体Overlap的做法，论坛里面有很多帖子，自己搜搜
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2楼2014-06-25 10:36:48
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带锁的季节

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-06-25 10:36:48
把你这个问题简化为：
你现在有DNA A片段和B片段，你现在想把A和B fusion起来，最简单的方法就是设计引物做Overlap PCR，具体Overlap的做法，论坛里面有很多帖子，自己搜搜

在A和B之间有一个共同酶切位点，我可以把它连起来，可是我不知道的是A和B直接连还是A与B互补链连，这两种连接方式哪一种能使我的两个ATG均能正确翻译成M
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3楼2014-06-25 11:15:01
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gyesang

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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:31:40
带锁的季节: 金币+3, ★有帮助 2014-06-26 08:52:52
引用回帖:
3楼: Originally posted by 带锁的季节 at 2014-06-25 11:15:01
在A和B之间有一个共同酶切位点，我可以把它连起来，可是我不知道的是A和B直接连还是A与B互补链连，这两种连接方式哪一种能使我的两个ATG均能正确翻译成M...

不知道你的基因是在同一条DNA链上，还是在DNA的两条链上，总之就是将有义链连接在一起，在A和B之间有一个共同酶切位点的话，是可以连接起来的，连接的时候要考虑读码框的问题

不知道你是真核的还是原核的
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4楼2014-06-25 12:14:52
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带锁的季节

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2014-06-25 12:14:52
不知道你的基因是在同一条DNA链上，还是在DNA的两条链上，总之就是将有义链连接在一起，在A和B之间有一个共同酶切位点的话，是可以连接起来的，连接的时候要考虑读码框的问题

不知道你是真核的还是原核的...

其实就是您说的有义链的问题，我不知道应该放在一条DNA链上还是两条DNA上 ， 做的是真核，我是不是应该把这两段放在一条链上就行是吗
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5楼2014-06-25 13:55:10
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Beryl_xu

铁虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-25 19:33:37
可以用PCR方法，先设计引物，然后PCR扩增，跑电泳，切割电泳胶，然后做纯化就好了。
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6楼2014-06-25 17:18:37
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gyesang

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引用回帖:
5楼: Originally posted by 带锁的季节 at 2014-06-25 13:55:10
其实就是您说的有义链的问题，我不知道应该放在一条DNA链上还是两条DNA上 ， 做的是真核，我是不是应该把这两段放在一条链上就行是吗...

当然是放在一条链上啊，不是共用一个启动子吗，你两段序列都是放在同一启动子的下游啊
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7楼2014-06-25 19:34:33
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带锁的季节

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by gyesang at 2014-06-25 19:34:33
当然是放在一条链上啊，不是共用一个启动子吗，你两段序列都是放在同一启动子的下游啊...

谢谢，好像懂了些
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8楼2014-06-26 08:54:27
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爨乡主人

木虫 (正式写手)
★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-07-15 12:36:02
用重叠延伸PCR可以连接。
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9楼2014-06-28 16:07:04
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