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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物化学 » DEAE柱0.1mol/l的Nacl洗脱曲线比较怪
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陶盛昌

木虫 (正式写手)

[求助] DEAE柱0.1mol/l的Nacl洗脱曲线比较怪 已有5人参与

各位虫友，请教几个问题：
       提取的植物性多糖，过DEAE-52纤维柱，然后用0.1mol/l洗脱，流速1ml/min，每管接10ml，接收了60管，然后进行紫外测定。洗脱的曲线不是一个峰，而是几个小峰，请教各位是什么问题？是拖尾还是什么？另外，吸光度很小，是不是说明糖没洗脱下来，应当弃去。请看图

DEAE柱0.1mol/l的Nacl洗脱曲线比较怪
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@@@@@@
1楼 2014-06-17 17:13:39
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lihuan0525

金虫 (职业作家)
★
感谢参与，应助指数 +1
辣笔v小新: 金币+1, 应助指数-1, 鼓励应助交流 2014-06-18 11:22:41
楼主对自己要提取的多糖的性质有一个了解啊，这样的话才更容易找到什么时候多糖被洗脱下来啊，
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2楼2014-06-17 20:13:12
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陶盛昌

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lihuan0525 at 2014-06-17 20:13:12
楼主对自己要提取的多糖的性质有一个了解啊，这样的话才更容易找到什么时候多糖被洗脱下来啊，

能说得更详细一点吗？虚心求教
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@@@@@@
3楼2014-06-17 20:34:54
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lihuan0525

金虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 陶盛昌 at 2014-06-17 20:34:54
能说得更详细一点吗？虚心求教...

就是你要提取的多糖，你得知道紫外吸收吧，几个峰里，可能有一个峰就是多糖的，也可能都不是，因为里面肯定会有杂质的。所以楼主需要知道多糖的紫外。
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4楼2014-06-17 20:43:48
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陶盛昌

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lihuan0525 at 2014-06-17 20:43:48
就是你要提取的多糖，你得知道紫外吸收吧，几个峰里，可能有一个峰就是多糖的，也可能都不是，因为里面肯定会有杂质的。所以楼主需要知道多糖的紫外。...

先谢谢，我测得紫外就是多糖的紫外，488nm测得的，按说就应该是一个单一的峰，我前面提取时，去过脂，除过蛋白质，色素也很少，粗多糖是白色的，前面用水洗脱的多糖液也测了吸光度，是一个单一的峰，按说，0.1mol/l的Nacl洗脱的多糖液测得紫外吸光度所作曲线也应该是一个单一的峰的。
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@@@@@@
5楼2014-06-17 22:16:29
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神雕哥

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
辣笔v小新: 金币+1, 鼓励应助交流 2014-06-18 11:23:07
陶盛昌: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢，我再试试 2014-06-19 08:33:32
你这种情况2中可能，首先建议你减少每管收集的体积，可以改为5 mL/管，再就是你收集用的试管没有刷干净（可能性比较大），试管刷不干净就会造成突然某一管的吸收度增大。正常说来出现一个峰应该是多个管都有多糖吸收。
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6楼2014-06-18 10:06:45
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fengzshang

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
辣笔v小新: 金币+1, 鼓励应助交流 2014-07-15 02:38:57
建议先用水洗，把中性多糖洗下来，再用梯度洗脱酸性多糖，我们实验室用的是0-1.5M Nacl，洗1.5个柱体积，多数的多糖都能洗下来。
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7楼2014-07-14 15:56:33
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torekill

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
辣笔v小新: 金币+1, 鼓励应助交流 2014-07-15 02:39:21
你这个吸光度有点低   建议提高浓度，让吸光度在0.2~0.8之间
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8楼2014-07-14 21:28:43
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陶盛昌

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by torekill at 2014-07-14 21:28:43
你这个吸光度有点低   建议提高浓度，让吸光度在0.2~0.8之间

谢谢，怎么提高浓度？减小每管收集的体积吗
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@@@@@@
9楼2014-07-16 15:28:22
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风竹林

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lihuan0525 at 2014-06-17 20:13:12
楼主对自己要提取的多糖的性质有一个了解啊，这样的话才更容易找到什么时候多糖被洗脱下来啊，

您好！ 我也再做植物多糖的纯化，过DEAE-52纤维柱，上样量10mL（浓度50mg/mL），然后用0.1mol/L NaCl洗脱，流速1ml/min，每管接10ml，接收了70管，逐管进行紫外测定（OD490nm）。洗脱的曲线不是一个峰，而是出现一个峰值后开始出现拖尾现象，且有几个小峰，请教这个是什么原因呢？
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10楼2017-02-10 20:32:24
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