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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 流式细胞术样品处理
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丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)

[求助] 流式细胞术样品处理 已有1人参与

用流式检测细胞凋亡时，按说明书处理完样品，上机时发现管内有很多肉眼可见的颗粒，吹吸多次，震荡，都不能弄掉，这是因为什么呢？

用流式检测ROS时，rosup样品和加药样品都是阴性的，且几乎没峰，但裸细胞有很好的峰，这又是为什么呢？

求助啊，做什么实验都能出现怪问题。。。哎。。。
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我要我的自由！
1楼 2014-06-09 19:19:30
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丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zjf710 at 2014-06-10 01:36:31
最可能的原因：固定的时候，细胞破碎了。
细胞在凋亡的时候，细胞膜很脆弱，加上乙醇固定，如果剧烈吹吸、震荡，细胞必然破碎成脂质球。
说明你的药物诱导凋亡能力太强，建议降低药物浓度，收集细胞时小心一些。最 ...

不对啊，做凋亡双染的时候不用固定啊
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我要我的自由！
3楼2014-06-10 08:48:59
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zjf710

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
丫头“笑笑”: 金币+2, ★有帮助 2014-06-11 08:57:01
最可能的原因：固定的时候，细胞破碎了。
细胞在凋亡的时候，细胞膜很脆弱，加上乙醇固定，如果剧烈吹吸、震荡，细胞必然破碎成脂质球。
说明你的药物诱导凋亡能力太强，建议降低药物浓度，收集细胞时小心一些。最好用1000ul的枪头吹吸，把250ul细胞悬液，轻轻加入750ul 95%乙醇中，再轻轻混匀。
这样固定得到的细胞可能会好些。
祝成功！
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三人行，必有我师焉
2楼2014-06-10 01:36:31
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zjf710

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 丫头“笑笑” at 2014-06-10 08:48:59
不对啊，做凋亡双染的时候不用固定啊...

那建议你不要用流式做凋亡，有可能的话用激光共聚焦吧。
药物干预的细胞很容易在收集的时候破碎。
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三人行，必有我师焉
4楼2014-06-10 13:20:30
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