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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 生物效应评价 » 关于MTT的操作问题
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sssyly

金虫 (小有名气)

[求助] 关于MTT的操作问题 已有2人参与

在做MTT时，与材料共孵育48h后，显微镜下观察到了细胞的明显皱缩，但是加入MTT4h后，加DMSO溶解，理论上应该具有明显毒性的组没有体现出细胞毒性，整块板子的OD值没有明显差异，测完之后在显微镜下观察 发现96孔板底部还附着一层细胞，不知是不是底部的细胞影响了实验结果，还是操作过程中有什么问题，导致了MTT结果有问题
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1楼 2014-06-09 19:10:59
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Xiang_cai145

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sssyly: 金币+5, ★有帮助 2014-06-17 09:01:40
mtt这玩意儿结果与操作有很大关系……论坛上有很多关于这个实验的经验总结，建议你多读一下。

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-06-09 23:28:14
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llh_2008

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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sssyly: 金币+15, ★有帮助 2014-06-17 09:01:51
MTT步骤简单，估计不是操作问题。
在孔板底部的细胞层肯定会影响你的结果，除非是药物释放或者水溶性快速降解材料。你可以浓缩细胞悬液，以微升级的悬液（计算好细胞数目）滴到灭菌处理后的实验组和control组材料表面上，置入孵箱1-4个小时（根据你细胞的特点来确定时间）以便于细胞粘附贴壁，然后再加入培养液。这样细胞就不会接触到材料底部了。
血清浓度也很重要，一般情况也要设置适合你材料的浓度。
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做个好人！
3楼2014-06-09 23:34:33
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sssyly

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by llh_2008 at 2014-06-09 23:34:33
MTT步骤简单，估计不是操作问题。
在孔板底部的细胞层肯定会影响你的结果，除非是药物释放或者水溶性快速降解材料。你可以浓缩细胞悬液，以微升级的悬液（计算好细胞数目）滴到灭菌处理后的实验组和control组材料表 ...

我的材料是水溶性的 我每次都是配成水溶液使用  不太能理解细胞悬液滴材料  是将材料先放在板子中 然后再向板子中滴细胞吗 可是这样会影响细胞的贴壁吧？求解释
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4楼2014-06-16 10:41:22
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