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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组质粒pET28a37℃诱导5小时SDS-PAGE有条带的，16℃过夜诱导什么条带都没有了
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fantasy111

铁虫 (小有名气)

[求助] 重组质粒pET28a37℃诱导5小时SDS-PAGE有条带的，16℃过夜诱导什么条带都没有了 已有1人参与

各位虫友，我的目标片段连在pET28a上，诱导出来的蛋白在7K左右，第一次做的时候37°诱导5小时，跑三层胶有条带，但都在沉淀里了，全菌体能看到，上清一点没有，我第二次就用16度诱导过夜了，结果上清和沉淀都没有条带，连全菌体都没有了，这是怎么个回事呢，纠结啊，跪求各位做诱导表达的大神解答，万分感谢！

重组质粒pET28a37℃诱导5小时SDS-PAGE有条带的，16℃过夜诱导什么条带都没有了
图片2.png


重组质粒pET28a37℃诱导5小时SDS-PAGE有条带的，16℃过夜诱导什么条带都没有了-1
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1楼 2014-06-07 13:45:41
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@木笔@

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
fantasy111(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-19 09:16:12
我也有做过PET28a这个载体，做蛋白诱导的时候，37℃确实有些就可以诱导出来。我想你的目的，是想说明蛋白的可溶性是吗？你有加标签吗？另外，就是每次做诱导的菌，最好是新转的，如果在平板上放置一段时间后，极有可能诱导不出来的。
赞一下(1人) 回复此楼
做最好的自己！
2楼2014-06-18 15:30:07
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