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fantasy111

铁虫 (小有名气)

[求助] 重组质粒pET28a37℃诱导5小时SDS-PAGE有条带的,16℃过夜诱导什么条带都没有了 已有1人参与

各位虫友,我的目标片段连在pET28a上,诱导出来的蛋白在7K左右,第一次做的时候37°诱导5小时,跑三层胶有条带,但都在沉淀里了,全菌体能看到,上清一点没有,我第二次就用16度诱导过夜了,结果上清和沉淀都没有条带,连全菌体都没有了,这是怎么个回事呢,纠结啊,跪求各位做诱导表达的大神解答,万分感谢!

重组质粒pET28a37℃诱导5小时SDS-PAGE有条带的,16℃过夜诱导什么条带都没有了
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重组质粒pET28a37℃诱导5小时SDS-PAGE有条带的,16℃过夜诱导什么条带都没有了-1
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@木笔@

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
fantasy111(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-19 09:16:12
我也有做过PET28a这个载体,做蛋白诱导的时候,37℃确实有些就可以诱导出来。我想你的目的,是想说明蛋白的可溶性是吗?你有加标签吗?另外,就是每次做诱导的菌,最好是新转的,如果在平板上放置一段时间后,极有可能诱导不出来的。
做最好的自己!
2楼2014-06-18 15:30:07
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