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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
40楼: Originally posted by beimi at 2014-08-17 21:04:58
重新做,可能是污染
...

污染?你的意思是治理污染了?我们做了两次,空载体对照都会发光,很亮。请问你们做的也是空载体对照吗?
41楼2014-08-18 16:22:25
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beimi

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
是的,必须要对照,不过我还做了酵母双杂交和gst pulldown to confirm the interaction,

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
42楼2014-08-19 23:38:56
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llyycc

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2014-06-04 16:43:30
我在做,有什么问题请详细列出来

您好,我想请问一下虫友,你做BiFc用Gateway的入门载体没有?还是就通过普通的重组载体构建的方法,先把目的基因克隆到克隆载体上,然后再双酶切回收与pSPYCE, pSPYNE对应的双酶切回收片段连接?
Youarewhatyouthink!
43楼2014-09-19 08:52:40
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starseacow

专家顾问 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
43楼: Originally posted by llyycc at 2014-09-19 08:52:40
您好,我想请问一下虫友,你做BiFc用Gateway的入门载体没有?还是就通过普通的重组载体构建的方法,先把目的基因克隆到克隆载体上,然后再双酶切回收与pSPYCE, pSPYNE对应的双酶切回收片段连接?...

我们的载体系统是基于gateway做的,包括BIFC载体,不用酶切回收,BP-LR反应就能完成克隆工作。
参见
Grefen, C. and Blatt, M.R. (2012). A 2in1 cloning system enables ratiometric bimolecular fluorescence complementation (rBiFC). Biotechniques 53: 311-314.
Karnik, R., Grefen, C., Bayne, R., Honsbein, A., Köhler, T., Kioumourtzoglou, D., Williams, M., Bryant, N.J., and Blatt, M.R. (2013). Arabidopsis Sec1/Munc18 Protein SEC11 Is a Competitive and Dynamic Modulator of SNARE Binding and SYP121-Dependent Vesicle Traffic. Plant Cell 25: 1368-1382.
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
44楼2014-09-20 15:30:03
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恰好

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
最近也计划做BiFC,但实验室之前没做过这个实验,所以有点儿怯怯的。请问有人愿意馈赠一点BiFC载体吗?或者购买也好。先谢谢!
45楼2015-04-29 23:39:33
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qingfeng2011

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
送红花一朵
引用回帖:
33楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-08-16 13:34:12
你好,我最近在做BiFC,阴性对照也有荧光,而且很亮很多,我得阴性对照是两个空载体,请问这种情况你是怎么解决的,希望能帮我解答一下,谢谢...

请问楼主,BiFC,阴性对照也有荧光,而且很亮很多的问题是怎么解决的呢?
46楼2016-01-05 17:00:57
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qingfeng2011

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
35楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-08-16 13:39:08
你好,我的也是同样的问题,而且我得阴性对照(两个空载体)远远比我的实验组荧光强得多,理论上两个空载体的荧光蛋白碰撞几率小于互作的呀,怎么回事?...

请问楼主,bifc阴性对照远远比实验组荧光强得多的问题是怎么解决的呢?
47楼2016-01-05 17:02:12
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清明小胖

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
46楼: Originally posted by qingfeng2011 at 2016-01-05 17:00:57
请问楼主,BiFC,阴性对照也有荧光,而且很亮很多的问题是怎么解决的呢?...

你好,请问你现在有解决吗?我最近在做也是NE-CE,空的负对照很亮
48楼2018-10-24 12:16:45
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清明小胖

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2014-06-04 16:43:30
我在做,有什么问题请详细列出来

BiFC,阴性对照也有荧光,而且很亮很多的问题是怎么解决的呢?
49楼2018-10-24 12:22:50
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清明小胖

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
41楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-08-18 16:22:25
污染?你的意思是治理污染了?我们做了两次,空载体对照都会发光,很亮。请问你们做的也是空载体对照吗?...

我也遇到了这种情况,请问,你是怎么结局的?
50楼2018-10-24 12:27:27
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