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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 有人在做BiFC吗？
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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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40楼: Originally posted by beimi at 2014-08-17 21:04:58
重新做，可能是污染
...

污染？你的意思是治理污染了？我们做了两次，空载体对照都会发光，很亮。请问你们做的也是空载体对照吗？
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41楼2014-08-18 16:22:25
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beimi

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是的，必须要对照，不过我还做了酵母双杂交和gst pulldown to confirm the interaction,

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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42楼2014-08-19 23:38:56
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llyycc

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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2楼: Originally posted by starseacow at 2014-06-04 16:43:30
我在做，有什么问题请详细列出来

您好，我想请问一下虫友，你做BiFc用Gateway的入门载体没有？还是就通过普通的重组载体构建的方法，先把目的基因克隆到克隆载体上，然后再双酶切回收与pSPYCE, pSPYNE对应的双酶切回收片段连接？
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Youarewhatyouthink!
43楼2014-09-19 08:52:40
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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43楼: Originally posted by llyycc at 2014-09-19 08:52:40
您好，我想请问一下虫友，你做BiFc用Gateway的入门载体没有？还是就通过普通的重组载体构建的方法，先把目的基因克隆到克隆载体上，然后再双酶切回收与pSPYCE, pSPYNE对应的双酶切回收片段连接？...

我们的载体系统是基于gateway做的，包括BIFC载体，不用酶切回收，BP-LR反应就能完成克隆工作。
参见
Grefen, C. and Blatt, M.R. (2012). A 2in1 cloning system enables ratiometric bimolecular fluorescence complementation (rBiFC). Biotechniques 53: 311-314.
Karnik, R., Grefen, C., Bayne, R., Honsbein, A., Köhler, T., Kioumourtzoglou, D., Williams, M., Bryant, N.J., and Blatt, M.R. (2013). Arabidopsis Sec1/Munc18 Protein SEC11 Is a Competitive and Dynamic Modulator of SNARE Binding and SYP121-Dependent Vesicle Traffic. Plant Cell 25: 1368-1382.
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
44楼2014-09-20 15:30:03
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恰好

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
最近也计划做BiFC，但实验室之前没做过这个实验，所以有点儿怯怯的。请问有人愿意馈赠一点BiFC载体吗？或者购买也好。先谢谢！
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45楼2015-04-29 23:39:33
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qingfeng2011

金虫 (正式写手)
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33楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-08-16 13:34:12
你好，我最近在做BiFC，阴性对照也有荧光，而且很亮很多，我得阴性对照是两个空载体，请问这种情况你是怎么解决的，希望能帮我解答一下，谢谢...

请问楼主，BiFC，阴性对照也有荧光，而且很亮很多的问题是怎么解决的呢？
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46楼2016-01-05 17:00:57
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qingfeng2011

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
35楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-08-16 13:39:08
你好，我的也是同样的问题，而且我得阴性对照（两个空载体）远远比我的实验组荧光强得多，理论上两个空载体的荧光蛋白碰撞几率小于互作的呀，怎么回事？...

请问楼主，bifc阴性对照远远比实验组荧光强得多的问题是怎么解决的呢？
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47楼2016-01-05 17:02:12
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清明小胖

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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46楼: Originally posted by qingfeng2011 at 2016-01-05 17:00:57
请问楼主，BiFC，阴性对照也有荧光，而且很亮很多的问题是怎么解决的呢？...

你好，请问你现在有解决吗？我最近在做也是NE-CE，空的负对照很亮
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48楼2018-10-24 12:16:45
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清明小胖

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2014-06-04 16:43:30
我在做，有什么问题请详细列出来

BiFC，阴性对照也有荧光，而且很亮很多的问题是怎么解决的呢？
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49楼2018-10-24 12:22:50
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清明小胖

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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41楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-08-18 16:22:25
污染？你的意思是治理污染了？我们做了两次，空载体对照都会发光，很亮。请问你们做的也是空载体对照吗？...

我也遇到了这种情况，请问，你是怎么结局的？
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50楼2018-10-24 12:27:27
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