应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 有人在做BiFC吗？
535/6返回列表上一页123456下一页
查看: 8159  |  回复: 52
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
40楼: Originally posted by beimi at 2014-08-17 21:04:58
重新做，可能是污染
...

污染？你的意思是治理污染了？我们做了两次，空载体对照都会发光，很亮。请问你们做的也是空载体对照吗？
赞一下(1人) 回复此楼
41楼2014-08-18 16:22:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beimi

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是的，必须要对照，不过我还做了酵母双杂交和gst pulldown to confirm the interaction,

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
42楼2014-08-19 23:38:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

llyycc

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2014-06-04 16:43:30
我在做，有什么问题请详细列出来

您好，我想请问一下虫友，你做BiFc用Gateway的入门载体没有？还是就通过普通的重组载体构建的方法，先把目的基因克隆到克隆载体上，然后再双酶切回收与pSPYCE, pSPYNE对应的双酶切回收片段连接？
赞一下 回复此楼
Youarewhatyouthink!
43楼2014-09-19 08:52:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
43楼: Originally posted by llyycc at 2014-09-19 08:52:40
您好，我想请问一下虫友，你做BiFc用Gateway的入门载体没有？还是就通过普通的重组载体构建的方法，先把目的基因克隆到克隆载体上，然后再双酶切回收与pSPYCE, pSPYNE对应的双酶切回收片段连接？...

我们的载体系统是基于gateway做的，包括BIFC载体，不用酶切回收，BP-LR反应就能完成克隆工作。
参见
Grefen, C. and Blatt, M.R. (2012). A 2in1 cloning system enables ratiometric bimolecular fluorescence complementation (rBiFC). Biotechniques 53: 311-314.
Karnik, R., Grefen, C., Bayne, R., Honsbein, A., Köhler, T., Kioumourtzoglou, D., Williams, M., Bryant, N.J., and Blatt, M.R. (2013). Arabidopsis Sec1/Munc18 Protein SEC11 Is a Competitive and Dynamic Modulator of SNARE Binding and SYP121-Dependent Vesicle Traffic. Plant Cell 25: 1368-1382.
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
44楼2014-09-20 15:30:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恰好

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
最近也计划做BiFC，但实验室之前没做过这个实验，所以有点儿怯怯的。请问有人愿意馈赠一点BiFC载体吗？或者购买也好。先谢谢！
赞一下 回复此楼
45楼2015-04-29 23:39:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qingfeng2011

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送红花一朵
引用回帖:
33楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-08-16 13:34:12
你好，我最近在做BiFC，阴性对照也有荧光，而且很亮很多，我得阴性对照是两个空载体，请问这种情况你是怎么解决的，希望能帮我解答一下，谢谢...

请问楼主，BiFC，阴性对照也有荧光，而且很亮很多的问题是怎么解决的呢？
赞一下(1人) 回复此楼
46楼2016-01-05 17:00:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qingfeng2011

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
35楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-08-16 13:39:08
你好，我的也是同样的问题，而且我得阴性对照（两个空载体）远远比我的实验组荧光强得多，理论上两个空载体的荧光蛋白碰撞几率小于互作的呀，怎么回事？...

请问楼主，bifc阴性对照远远比实验组荧光强得多的问题是怎么解决的呢？
赞一下(1人) 回复此楼
47楼2016-01-05 17:02:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

清明小胖

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
46楼: Originally posted by qingfeng2011 at 2016-01-05 17:00:57
请问楼主，BiFC，阴性对照也有荧光，而且很亮很多的问题是怎么解决的呢？...

你好，请问你现在有解决吗？我最近在做也是NE-CE，空的负对照很亮
赞一下 回复此楼
48楼2018-10-24 12:16:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

清明小胖

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2014-06-04 16:43:30
我在做，有什么问题请详细列出来

BiFC，阴性对照也有荧光，而且很亮很多的问题是怎么解决的呢？
赞一下 回复此楼
49楼2018-10-24 12:22:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

清明小胖

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
41楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-08-18 16:22:25
污染？你的意思是治理污染了？我们做了两次，空载体对照都会发光，很亮。请问你们做的也是空载体对照吗？...

我也遇到了这种情况，请问，你是怎么结局的？
赞一下 回复此楼
50楼2018-10-24 12:27:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 鸦米 的主题更新
535/6返回列表上一页123456下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +13 羊腰板 2026-08-21 13/650 2026-08-23 09:25 by lfy8008
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 07:41 by OEbVnUOu01ol
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +4 简单化xn 2026-08-22 8/400 2026-08-23 07:20 by ilovexiaobin
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 10/500 2026-08-23 07:17 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:43 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 11/550 2026-08-23 02:55 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 什么时候开奖？ +7 CrisMessi 2026-08-18 8/400 2026-08-22 18:29 by 淀粉搬运工
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭