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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 有人在做BiFC吗？
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
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8楼: Originally posted by beimi at 2014-06-05 18:59:34
你好，请问你是利用什么方法避免背景干扰的，因为我最近做的阴性对照也有荧光信号，不知道如何确认结果。谢谢啦...

请参考我上面给出的回复，另外，对confocal进行比较好的设置也很重要。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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11楼2014-06-07 02:36:20
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beimi

木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by starseacow at 2014-06-07 02:36:20
请参考我上面给出的回复，另外，对confocal进行比较好的设置也很重要。
...

谢谢啊
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12楼2014-06-07 02:38:22
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鸦米

新虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by starseacow at 2014-06-07 02:27:04
我们组有自己做的载体，具体做法可以参考这篇文章
Grefen C, Blatt M Biotechnology 2012,53(5):311~314
另外，也可以参考
Karnik R et al. Plant Cell 2013,25(4):1368
...

谢谢，我会下来仔细看的
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13楼2014-06-07 10:46:46
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gyesang

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2楼: Originally posted by starseacow at 2014-06-04 16:43:30
我在做，有什么问题请详细列出来

我做的A蛋白和B蛋白确定有相互作用，但是用BiFc互补后，荧光很弱，你觉得会有什么可能的原因？
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14楼2014-06-07 11:57:06
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匿名

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15楼2014-06-07 12:17:36
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dingchaoyue

木虫 (著名写手)
★
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我也做过。你遇到什么问题呢？

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16楼2014-06-07 12:49:10
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starseacow

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14楼: Originally posted by gyesang at 2014-06-07 11:57:06
我做的A蛋白和B蛋白确定有相互作用，但是用BiFc互补后，荧光很弱，你觉得会有什么可能的原因？...

蛋白丰度不够可能是一个原因，另外，我觉得也可以考虑你究竟把荧光蛋白连接在目的蛋白的N端还是C端，这有时候也会影响荧光信号强度
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17楼2014-06-07 18:17:40
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qinxiaofeng
18楼2014-06-07 18:58:48
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gyesang

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17楼: Originally posted by starseacow at 2014-06-07 18:17:40
蛋白丰度不够可能是一个原因，另外，我觉得也可以考虑你究竟把荧光蛋白连接在目的蛋白的N端还是C端，这有时候也会影响荧光信号强度...

的确我的蛋白比较大，1700多个aa，荧光强度比较低，我想过可能有两个原因：
1. 荧光蛋白的N和C端，接上目的蛋白，目的蛋白影响了荧光蛋白正确构象的形成，导致互补后荧光强度低

2. 荧光蛋白的N或者C端能够形成正确的构象，但目的蛋白相互作用后，由于空间位置的关系，荧光蛋白的N端和C端，不能很好的靠在一起，彼此接近发出荧光

如果排除上述两种情况的影响
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19楼2014-06-07 19:08:22
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鸦米

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by dingchaoyue at 2014-06-07 12:49:10
我也做过。你遇到什么问题呢？

我还在准备阶段呢，还没有正式着手做，但因为实验室还没人做，所以想多问问。请问你是做的原生质体吗？还是烟草？
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20楼2014-06-07 19:10:41
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