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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

引用回帖:
8楼: Originally posted by beimi at 2014-06-05 18:59:34
你好,请问你是利用什么方法避免背景干扰的,因为我最近做的阴性对照也有荧光信号,不知道如何确认结果。谢谢啦...

请参考我上面给出的回复,另外,对confocal进行比较好的设置也很重要。

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11楼2014-06-07 02:36:20
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beimi

木虫 (著名写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by starseacow at 2014-06-07 02:36:20
请参考我上面给出的回复,另外,对confocal进行比较好的设置也很重要。
...

谢谢啊
12楼2014-06-07 02:38:22
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鸦米

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by starseacow at 2014-06-07 02:27:04
我们组有自己做的载体,具体做法可以参考这篇文章
Grefen C, Blatt M Biotechnology 2012,53(5):311~314
另外,也可以参考
Karnik R et al. Plant Cell 2013,25(4):1368
...

谢谢,我会下来仔细看的
13楼2014-06-07 10:46:46
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gyesang

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引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2014-06-04 16:43:30
我在做,有什么问题请详细列出来

我做的A蛋白和B蛋白确定有相互作用,但是用BiFc互补后,荧光很弱,你觉得会有什么可能的原因?
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
14楼2014-06-07 11:57:06
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匿名

用户注销 (初入文坛)

本帖仅楼主可见
15楼2014-06-07 12:17:36
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dingchaoyue

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也做过。你遇到什么问题呢?

[ 发自小木虫客户端 ]
16楼2014-06-07 12:49:10
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starseacow

专家顾问 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by gyesang at 2014-06-07 11:57:06
我做的A蛋白和B蛋白确定有相互作用,但是用BiFc互补后,荧光很弱,你觉得会有什么可能的原因?...

蛋白丰度不够可能是一个原因,另外,我觉得也可以考虑你究竟把荧光蛋白连接在目的蛋白的N端还是C端,这有时候也会影响荧光信号强度
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
17楼2014-06-07 18:17:40
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18楼2014-06-07 18:58:48
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gyesang

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
17楼: Originally posted by starseacow at 2014-06-07 18:17:40
蛋白丰度不够可能是一个原因,另外,我觉得也可以考虑你究竟把荧光蛋白连接在目的蛋白的N端还是C端,这有时候也会影响荧光信号强度...

的确我的蛋白比较大,1700多个aa,荧光强度比较低,我想过可能有两个原因:
1. 荧光蛋白的N和C端,接上目的蛋白,目的蛋白影响了荧光蛋白正确构象的形成,导致互补后荧光强度低

2. 荧光蛋白的N或者C端能够形成正确的构象,但目的蛋白相互作用后,由于空间位置的关系,荧光蛋白的N端和C端,不能很好的靠在一起,彼此接近发出荧光

如果排除上述两种情况的影响
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
19楼2014-06-07 19:08:22
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鸦米

新虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by dingchaoyue at 2014-06-07 12:49:10
我也做过。你遇到什么问题呢?

我还在准备阶段呢,还没有正式着手做,但因为实验室还没人做,所以想多问问。请问你是做的原生质体吗?还是烟草?
20楼2014-06-07 19:10:41
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