5楼: Originally posted by starseacow at 2014-06-05 15:08:29
我主要在拟南芥和烟草上做，实验室里也有人做原生质体，没什么特别要注意的，按照合适正确的protocol做就可以。做bifc，还是要尽可能避免背景干扰和假阳性结果。
我希望你把问题列出来而不是私下交流，是为了给其他 ...

31楼: Originally posted by 赵小花90 at 2014-06-10 11:11:03
你好，我最近在做烟草的原生质体，可是最近发现转化之前镜检原生质体都挺好的，为什么转化后次日看结果时基本上都是一坨一坨的黑色物质，而且可以看到此时的原生质体都是黑色颗粒了，还不太清楚是什么原因导致，希 ...

7楼: Originally posted by sarah-miao at 2014-06-05 17:09:05
您好，我想咨询下你手上的BIFC系统的阴性对照和阳性对照在正常转染情况下是否都存在荧光情况，另外您用来最后肯定两者存在相互作用是否是根据荧光蛋白的比例来衡量的还是其他的方法？之前做这方面的实验一直不是很 ...

8楼: Originally posted by beimi at 2014-06-05 18:59:34
你好，请问你是利用什么方法避免背景干扰的，因为我最近做的阴性对照也有荧光信号，不知道如何确认结果。谢谢啦...

14楼: Originally posted by gyesang at 2014-06-07 11:57:06
我做的A蛋白和B蛋白确定有相互作用，但是用BiFc互补后，荧光很弱，你觉得会有什么可能的原因？...

33楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-08-16 13:34:12
你好，我最近在做BiFC，阴性对照也有荧光，而且很亮很多，我得阴性对照是两个空载体，请问这种情况你是怎么解决的，希望能帮我解答一下，谢谢...

36楼: Originally posted by starseacow at 2014-08-16 18:33:19
你做的什么材料，动物细胞的话我帮不上忙。做BIFC有时候要看材料细胞质量和状态，另外，合适的confocal设定也很重要。如果你的两个空载有荧光，什么都不转的细胞有荧光么？...

37楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-08-16 20:05:32
我的是293T细胞，细胞新买的，状态很好，我还没照confocal，我先用正置的显微镜预实验，结果就出现这样的情况了，什么都不转没有荧光，请问你做植物细胞怎么做对照？...

38楼: Originally posted by starseacow at 2014-08-17 03:03:04
我们设置几个不同的对照，比如什么都不转的细胞，只转入空载的细胞，在载体上插入对照蛋白（比如我们用过的iLOV）等，有兴趣你可以参照实验室13年发的文章
Karnik et al. The Plant Cell  2013 Apr;25(4):1368-82...

34楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-08-16 13:34:31
你好，我最近在做BiFC，阴性对照也有荧光，而且很亮很多，我得阴性对照是两个空载体，请问这种情况你是怎么解决的，希望能帮我解答一下，谢谢...