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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 有人在做BiFC吗？
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范晓江

新虫 (初入文坛)
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BiFC背景信号是由于自身载体的原因，无法避免。即使两个空载体也会观察到荧光信号。所以我们一般是用文献报道过的确实不会发生互作的两个载体作为阴性对照，这样会好很多。还有可能你的两个目的基因表达后的蛋白本身互作能力不强，所以荧光信号偏弱，可以再用其它实验方法辅助验证，酵母双杂，CoIP与Pull-down都是很好的选择。
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51楼2018-10-25 11:03:41
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643107026

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2014-06-04 16:43:30
我在做，有什么问题请详细列出来

你好，我想请问一下，BiFC必须要做阳性对照吗？因为我们实验室以前没做过，只是有个师姐在她毕业前把实验组的载体构好了，现在我们要接着她的做，如果我们要重新构阳性对照的载体话要花很多时间，所以我们就想是不是没有必要在对照上花太多的时间。

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52楼2019-04-27 18:50:53
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xbbian

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
19楼: Originally posted by gyesang at 2014-06-07 19:08:22
的确我的蛋白比较大，1700多个aa，荧光强度比较低，我想过可能有两个原因：
1. 荧光蛋白的N和C端，接上目的蛋白，目的蛋白影响了荧光蛋白正确构象的形成，导致互补后荧光强度低

2. 荧光蛋白的N或者C端能够形成 ...

我目前也遇到这种情况，请问您怎么解决的？
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53楼2020-11-12 15:44:09
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