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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 有人在做BiFC吗？
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鸦米

新虫 (小有名气)

[交流] 有人在做BiFC吗？ 已有16人参与

因为我近期要做BiFC,我们实验室之前没有人做过，所以想请教曾经做过的朋友一些问题，哪位做过可以交流一下吗？
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1楼 2014-06-04 11:54:13
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泡菜肉丝

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7楼: Originally posted by sarah-miao at 2014-06-05 17:09:05
您好，我想咨询下你手上的BIFC系统的阴性对照和阳性对照在正常转染情况下是否都存在荧光情况，另外您用来最后肯定两者存在相互作用是否是根据荧光蛋白的比例来衡量的还是其他的方法？之前做这方面的实验一直不是很 ...

你好，我最近在做BiFC，阴性对照也有荧光，而且很亮很多，我得阴性对照是两个空载体，请问这种情况你是怎么解决的，希望能帮我解答一下，谢谢
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qingfeng2011
33楼2014-08-16 13:34:12
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泡菜肉丝

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8楼: Originally posted by beimi at 2014-06-05 18:59:34
你好，请问你是利用什么方法避免背景干扰的，因为我最近做的阴性对照也有荧光信号，不知道如何确认结果。谢谢啦...

你好，我最近在做BiFC，阴性对照也有荧光，而且很亮很多，我得阴性对照是两个空载体，请问这种情况你是怎么解决的，希望能帮我解答一下，谢谢
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34楼2014-08-16 13:34:31
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泡菜肉丝

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14楼: Originally posted by gyesang at 2014-06-07 11:57:06
我做的A蛋白和B蛋白确定有相互作用，但是用BiFc互补后，荧光很弱，你觉得会有什么可能的原因？...

你好，我的也是同样的问题，而且我得阴性对照（两个空载体）远远比我的实验组荧光强得多，理论上两个空载体的荧光蛋白碰撞几率小于互作的呀，怎么回事？
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qingfeng2011
35楼2014-08-16 13:39:08
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泡菜肉丝

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36楼: Originally posted by starseacow at 2014-08-16 18:33:19
你做的什么材料，动物细胞的话我帮不上忙。做BIFC有时候要看材料细胞质量和状态，另外，合适的confocal设定也很重要。如果你的两个空载有荧光，什么都不转的细胞有荧光么？...

我的是293T细胞，细胞新买的，状态很好，我还没照confocal，我先用正置的显微镜预实验，结果就出现这样的情况了，什么都不转没有荧光，请问你做植物细胞怎么做对照？
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37楼2014-08-16 20:05:32
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泡菜肉丝

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38楼: Originally posted by starseacow at 2014-08-17 03:03:04
我们设置几个不同的对照，比如什么都不转的细胞，只转入空载的细胞，在载体上插入对照蛋白（比如我们用过的iLOV）等，有兴趣你可以参照实验室13年发的文章
Karnik et al. The Plant Cell  2013 Apr;25(4):1368-82...

嗯，看前面的评论就下载了，正在学习中，又不懂得再请教您，谢谢
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39楼2014-08-17 10:53:12
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泡菜肉丝

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40楼: Originally posted by beimi at 2014-08-17 21:04:58
重新做，可能是污染
...

污染？你的意思是治理污染了？我们做了两次，空载体对照都会发光，很亮。请问你们做的也是空载体对照吗？
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41楼2014-08-18 16:22:25
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