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鸦米

新虫 (小有名气)

[交流] 有人在做BiFC吗?已有16人参与

因为我近期要做BiFC,我们实验室之前没有人做过,所以想请教曾经做过的朋友一些问题,哪位做过可以交流一下吗?
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starseacow

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43楼: Originally posted by llyycc at 2014-09-19 08:52:40
您好,我想请问一下虫友,你做BiFc用Gateway的入门载体没有?还是就通过普通的重组载体构建的方法,先把目的基因克隆到克隆载体上,然后再双酶切回收与pSPYCE, pSPYNE对应的双酶切回收片段连接?...

我们的载体系统是基于gateway做的,包括BIFC载体,不用酶切回收,BP-LR反应就能完成克隆工作。
参见
Grefen, C. and Blatt, M.R. (2012). A 2in1 cloning system enables ratiometric bimolecular fluorescence complementation (rBiFC). Biotechniques 53: 311-314.
Karnik, R., Grefen, C., Bayne, R., Honsbein, A., Köhler, T., Kioumourtzoglou, D., Williams, M., Bryant, N.J., and Blatt, M.R. (2013). Arabidopsis Sec1/Munc18 Protein SEC11 Is a Competitive and Dynamic Modulator of SNARE Binding and SYP121-Dependent Vesicle Traffic. Plant Cell 25: 1368-1382.
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
44楼2014-09-20 15:30:03
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starseacow

专家顾问 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我在做,有什么问题请详细列出来

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植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2014-06-04 16:43:30
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鸦米

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2014-06-04 16:43:30
我在做,有什么问题请详细列出来

可以留下QQ吗?我刚开始做,实验室也没有人做过,可能问题会比较多
3楼2014-06-05 08:23:55
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鸦米

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2014-06-04 16:43:30
我在做,有什么问题请详细列出来

要是不方便的化我先问几个问题吧,你们是转的拟南芥原生质体吗?操作上有什么需要注意的吗?
4楼2014-06-05 08:25:54
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