应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 水产品、畜产品 » 肌原纤维蛋白你们是如何提取的？
51/1返回列表
查看: 3587  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

bw2318

木虫 (小有名气)

[求助] 肌原纤维蛋白你们是如何提取的？ 已有3人参与

小弟提了很多天了， 主要用的是磷酸盐缓冲液和氯化钠溶液，然后离心提取的。。。。就是没提出来。以下是我的提取步骤：
   准确称量一定量的肉样绞碎，添加肉样量4倍体积的磷酸缓冲液，高速匀浆1min，然后离心15min(2000g、4℃)，倒出上清液，重复以上步骤两次。然后用4倍体积的NaCl溶液冲洗沉淀，高速匀浆30s，然后离心15min（2000g、4℃），倒出上清液。将8倍体积NaCl溶液与沉淀混合，并用四层纱布过滤。调整混合溶液的pH为6.2，然后离心15min（2000g、4℃），倒掉上清液，剩余残渣就是肌原纤维蛋白。

个人做预实验中认为有几点问题，不知是否是问题的根源：
1.试剂可能根本提不出力？
2.离心速度不够？
3.纱布过滤时，烧杯外漏了很多液体，是损失了很多蛋白吗？ 有经验的前辈是否有过此类经历？
4.调整PH值时，几乎没怎么调整就到等电点了，这没想通。

请前辈们给点意见，以及需要我纠正的地方？拜托了，小弟再不提出来老板就要怒了。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-05-20 08:52:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王阿帆

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by bw2318 at 2014-05-23 09:27:08
请问，你提取前经过加热没，我的是加热后提取的
...

想问一下楼主提出肌原纤维蛋白了么？我的也是加热过的，提不出来蛋白啊
赞一下 回复此楼
9楼2019-09-29 15:01:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

答非所问

荣誉版主 (职业作家)

ET.....

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zybpxy: 金币+2, 鼓励专家应助 2014-05-20 10:06:35
我想说两点：1、离心的速度太低，我一般都是8000g 20min
                  2、pH我一般用的6.8.
赞一下(1人) 回复此楼
获取网盘密码请点击：http://emuch.net/bbs/box.php（复制之后，黏贴到浏览器地址栏）
2楼2014-05-20 08:58:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bw2318

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 答非所问 at 2014-05-20 08:58:39
我想说两点：1、离心的速度太低，我一般都是8000g 20min
                  2、pH我一般用的6.8.

我们实验室最高转速10000r/min。你的转速可能打不到。我用的试剂都是中性试剂，你的ph为何会那么高

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
3楼2014-05-20 09:01:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

woodsorrel

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用的应该是Xiong的方法，可以提的出，因为肌原纤维蛋白是盐溶蛋白，不溶于低离子强度溶液，离心力2000 g足够把它离下了。纱布过滤你可以把纱布中间压低点，弄出一个凹面来，少放液体，放在4度慢点过滤。过滤的目的是去掉肌膜、结缔组织，但纱布孔径那么大，对你的蛋白组成没有影响，至于损失的蛋白，你需要计算提取率吗？你说的pH多少是等电点，肌原纤维蛋白的等电点5.0~5.2，你是用多大浓度的HCl调的？这个方法还要注意，你如果后期要看蛋白的结构、变性的话，要冰上操作，包括你前面的取肉样，注意温度。
赞一下 回复此楼
4楼2014-05-22 20:33:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭