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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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bw2318

木虫 (小有名气)

[求助] 肌原纤维蛋白你们是如何提取的？ 已有3人参与

小弟提了很多天了， 主要用的是磷酸盐缓冲液和氯化钠溶液，然后离心提取的。。。。就是没提出来。以下是我的提取步骤：
   准确称量一定量的肉样绞碎，添加肉样量4倍体积的磷酸缓冲液，高速匀浆1min，然后离心15min(2000g、4℃)，倒出上清液，重复以上步骤两次。然后用4倍体积的NaCl溶液冲洗沉淀，高速匀浆30s，然后离心15min（2000g、4℃），倒出上清液。将8倍体积NaCl溶液与沉淀混合，并用四层纱布过滤。调整混合溶液的pH为6.2，然后离心15min（2000g、4℃），倒掉上清液，剩余残渣就是肌原纤维蛋白。

个人做预实验中认为有几点问题，不知是否是问题的根源：
1.试剂可能根本提不出力？
2.离心速度不够？
3.纱布过滤时，烧杯外漏了很多液体，是损失了很多蛋白吗？ 有经验的前辈是否有过此类经历？
4.调整PH值时，几乎没怎么调整就到等电点了，这没想通。

请前辈们给点意见，以及需要我纠正的地方？拜托了，小弟再不提出来老板就要怒了。
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1楼 2014-05-20 08:52:44
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bw2318

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 答非所问 at 2014-05-20 08:58:39
我想说两点：1、离心的速度太低，我一般都是8000g 20min
                  2、pH我一般用的6.8.

我们实验室最高转速10000r/min。你的转速可能打不到。我用的试剂都是中性试剂，你的ph为何会那么高

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3楼2014-05-20 09:01:01
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答非所问

荣誉版主 (职业作家)

ET.....

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zybpxy: 金币+2, 鼓励专家应助 2014-05-20 10:06:35
我想说两点：1、离心的速度太低，我一般都是8000g 20min
                  2、pH我一般用的6.8.
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2楼2014-05-20 08:58:39
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woodsorrel

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用的应该是Xiong的方法，可以提的出，因为肌原纤维蛋白是盐溶蛋白，不溶于低离子强度溶液，离心力2000 g足够把它离下了。纱布过滤你可以把纱布中间压低点，弄出一个凹面来，少放液体，放在4度慢点过滤。过滤的目的是去掉肌膜、结缔组织，但纱布孔径那么大，对你的蛋白组成没有影响，至于损失的蛋白，你需要计算提取率吗？你说的pH多少是等电点，肌原纤维蛋白的等电点5.0~5.2，你是用多大浓度的HCl调的？这个方法还要注意，你如果后期要看蛋白的结构、变性的话，要冰上操作，包括你前面的取肉样，注意温度。
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4楼2014-05-22 20:33:17
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bw2318

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by woodsorrel at 2014-05-22 20:33:17
你用的应该是Xiong的方法，可以提的出，因为肌原纤维蛋白是盐溶蛋白，不溶于低离子强度溶液，离心力2000 g足够把它离下了。纱布过滤你可以把纱布中间压低点，弄出一个凹面来，少放液体，放在4度慢点过滤。过滤的目的 ...

我是在加热基础上提取的，如你所说用的是xiong的方法，到调节ph时，几乎不用调就到6.2，我就感到很不对了。HCl我用的是0.01M。至于最后测得的性质主要是巯基，晗变，浊度等

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5楼2014-05-23 08:19:30
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