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bw2318木虫 (小有名气)
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肌原纤维蛋白你们是如何提取的？ 已有3人参与
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小弟提了很多天了， 主要用的是磷酸盐缓冲液和氯化钠溶液，然后离心提取的。。。。就是没提出来。以下是我的提取步骤： 准确称量一定量的肉样绞碎，添加肉样量4倍体积的磷酸缓冲液，高速匀浆1min，然后离心15min(2000g、4℃)，倒出上清液，重复以上步骤两次。然后用4倍体积的NaCl溶液冲洗沉淀，高速匀浆30s，然后离心15min（2000g、4℃），倒出上清液。将8倍体积NaCl溶液与沉淀混合，并用四层纱布过滤。调整混合溶液的pH为6.2，然后离心15min（2000g、4℃），倒掉上清液，剩余残渣就是肌原纤维蛋白。 个人做预实验中认为有几点问题，不知是否是问题的根源： 1.试剂可能根本提不出力？ 2.离心速度不够？ 3.纱布过滤时，烧杯外漏了很多液体，是损失了很多蛋白吗？ 有经验的前辈是否有过此类经历？ 4.调整PH值时，几乎没怎么调整就到等电点了，这没想通。 请前辈们给点意见，以及需要我纠正的地方？拜托了，小弟再不提出来老板就要怒了。 |
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bw2318
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