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吉部落zy

金虫 (小有名气)

[求助] pcr之后跑琼脂糖 优化,最后要跑聚丙烯酰胺的,希望大家给个优化方向,谢谢! 已有6人参与

pcr  体系为20 ul:水  5ul
                     DNA:  5ul
                     buffer:2ul
                     dNTP:1.5ul
                    引物1::1.5
                   引物2:   1.5
                        酶:  2
前三个是降落 pcr  靠近marker的是45 退货  35个c  谢谢了   给个建议进行优化!

pcr之后跑琼脂糖 优化,最后要跑聚丙烯酰胺的,希望大家给个优化方向,谢谢!
Administrator 2014-05-17 16 小时 34 分钟.jpg
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我可以哭泣,可以悲伤,但我不可以不坚强。
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吉部落zy

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yuren2009 at 2014-05-18 11:04:48
你的目的片段多大?建议减少下体系中各成分。

80- 250 bp之间
我可以哭泣,可以悲伤,但我不可以不坚强。
5楼2014-05-18 15:34:17
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怎么都行

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-05-18 17:08:50
我不知道你的DNA浓度多大,但根据经验判断,20ul体系里面加四分之一体积的模版,是不是有点太多了?
2楼2014-05-17 22:31:34
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的目的片段多大?建议减少下体系中各成分。
学习使你立于不败之地
3楼2014-05-18 11:04:48
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吉部落zy

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 怎么都行 at 2014-05-17 22:31:34
我不知道你的DNA浓度多大,但根据经验判断,20ul体系里面加四分之一体积的模版,是不是有点太多了?

我是用试剂盒提的DNA   60ng/UL   前几次加2ul 几乎批不出来 ,后来试了三ul  不亮 最后加了5ul
我可以哭泣,可以悲伤,但我不可以不坚强。
4楼2014-05-18 15:33:49
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