应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr之后跑琼脂糖 优化，最后要跑聚丙烯酰胺的，希望大家给个优化方向，谢谢！
221/3返回列表123下一页
查看: 1297  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

吉部落zy

金虫 (小有名气)

[求助] pcr之后跑琼脂糖 优化，最后要跑聚丙烯酰胺的，希望大家给个优化方向，谢谢！ 已有6人参与

pcr  体系为20 ul：水  5ul
                     DNA：  5ul
                     buffer：2ul
                     dNTP：1.5ul
                    引物1：:1.5
                   引物2：   1.5
                        酶：  2
前三个是降落 pcr  靠近marker的是45 退货  35个c  谢谢了   给个建议进行优化！

pcr之后跑琼脂糖 优化，最后要跑聚丙烯酰胺的，希望大家给个优化方向，谢谢！
Administrator 2014-05-17 16 小时 34 分钟.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
我可以哭泣，可以悲伤，但我不可以不坚强。
1楼 2014-05-17 20:57:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

怎么都行

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-18 17:08:50
我不知道你的DNA浓度多大，但根据经验判断，20ul体系里面加四分之一体积的模版，是不是有点太多了？
赞一下 回复此楼
2楼2014-05-17 22:31:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的目的片段多大？建议减少下体系中各成分。
赞一下 回复此楼
学习使你立于不败之地
3楼2014-05-18 11:04:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吉部落zy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 怎么都行 at 2014-05-17 22:31:34
我不知道你的DNA浓度多大，但根据经验判断，20ul体系里面加四分之一体积的模版，是不是有点太多了？

我是用试剂盒提的DNA   60ng/UL   前几次加2ul 几乎批不出来 ，后来试了三ul  不亮 最后加了5ul
赞一下 回复此楼
我可以哭泣，可以悲伤，但我不可以不坚强。
4楼2014-05-18 15:33:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吉部落zy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yuren2009 at 2014-05-18 11:04:48
你的目的片段多大？建议减少下体系中各成分。

80- 250 bp之间
回复此楼
我可以哭泣，可以悲伤，但我不可以不坚强。
5楼2014-05-18 15:34:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-18 17:08:59
图中亮的位置在100bp下，也是二聚体出现的位置，很难与目的条带区分。没有条带可能是引物的问题，DNA量要求不大。buffer含镁离子的那种？
赞一下 回复此楼
学习使你立于不败之地
6楼2014-05-18 16:52:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxncas-2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-18 17:09:06
反应体系中你的各种成分之间的配比好像不是很好！ 建议你还是优化一下体系。模板的量，引物的量，还有酶的量都太多了！有些时候，酶过多并一定是好事！
赞一下 回复此楼
7楼2014-05-18 17:08:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxncas-2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
吉部落zy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-18 19:54:47
如果你想排除引物二聚体的干扰，可以尝试一下换hot-start 酶，这个引物二聚体会少很多！
赞一下 回复此楼
8楼2014-05-18 17:09:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
吉部落zy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-18 19:54:58
你的 dNTP浓度是多少？ 引物的浓度是多少？酶的活力是多少？这些加多加少是根据工作浓度来的，而不是根据体积来的，浓度大就少加，浓度下自然就多加
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
9楼2014-05-18 17:11:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
吉部落zy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-18 19:55:09
lz的20ul体系怎么少了1.5ul？初只看体系，DNA浓度在整个体系比例中高了，改成这样不知意下如何pcr  体系为20 ul：水  5ul
                     DNA：  4ul
                     buffer：2.5ul
                     dNTP：3.5ul
                    引物1：:1.5
                   引物2：   1.5
                        酶：  2
赞一下 回复此楼
有些东西因为得不到而变得美好，有些东西因为拥有而变得弥足珍贵！
10楼2014-05-18 17:17:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 吉部落zy 的主题更新
221/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] 各位大神，目前国内有哪些比较好用的逆合成软件？ 20+3 zapen 2026-09-15 8/400 2026-09-18 10:14 by tianliang0414
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +8 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 9/450 2026-09-18 10:04 by yS4CkeWDhD6V
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 8/400 2026-09-18 09:28 by yS4CkeWDhD6V
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 C79jjtjAKjEn 2026-09-15 3/150 2026-09-18 03:30 by cITaGg3p5edr
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-18 02:16 by cITaGg3p5edr
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-17 23:28 by cuPZTDXS3VOd
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-17 23:16 by cuPZTDXS3VOd
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-17 23:05 by cuPZTDXS3VOd
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +7 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 9/450 2026-09-17 23:05 by cuPZTDXS3VOd
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-17 14:27 by ObVzqQQh1rrE
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 0pYnUiPDfdnk 2026-09-14 4/200 2026-09-17 14:15 by ObVzqQQh1rrE
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 23jxep3nCNZb 2026-09-14 6/300 2026-09-17 13:27 by ObVzqQQh1rrE
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 yaCh4X3wd045 2026-09-14 4/200 2026-09-17 13:17 by ObVzqQQh1rrE
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 5/250 2026-09-17 13:17 by ObVzqQQh1rrE
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-17 13:15 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-17 12:39 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 4/200 2026-09-17 04:28 by k06BKNblrGRH
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-16 22:26 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-16 19:15 by rRvxEj3zorCy
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 16:00 by i3KBRD19ERkG
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭