应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr之后跑琼脂糖 优化，最后要跑聚丙烯酰胺的，希望大家给个优化方向，谢谢！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
222/3返回列表上一页123下一页
查看: 1101  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

吉部落zy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yuren2009 at 2014-05-18 16:52:17
图中亮的位置在100bp下，也是二聚体出现的位置，很难与目的条带区分。没有条带可能是引物的问题，DNA量要求不大。buffer含镁离子的那种？

buffer里有mg离子

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
我可以哭泣，可以悲伤，但我不可以不坚强。
11楼2014-05-18 20:54:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吉部落zy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yuren2009 at 2014-05-18 11:04:48
你的目的片段多大？建议减少下体系中各成分。

目的片段  80-250之间的
赞一下 回复此楼
我可以哭泣，可以悲伤，但我不可以不坚强。
12楼2014-05-19 12:06:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吉部落zy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-18 17:11:01
你的 dNTP浓度是多少？ 引物的浓度是多少？酶的活力是多少？这些加多加少是根据工作浓度来的，而不是根据体积来的，浓度大就少加，浓度下自然就多加

dNTP是10mM  引物为10mM   没活力是 2U/ul
赞一下 回复此楼
我可以哭泣，可以悲伤，但我不可以不坚强。
13楼2014-05-19 12:08:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吉部落zy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 867575969 at 2014-05-18 17:17:56
lz的20ul体系怎么少了1.5ul？初只看体系，DNA浓度在整个体系比例中高了，改成这样不知意下如何pcr  体系为20 ul：水  5ul
                     DNA：  4ul
                     buffer：2.5ul
                ...

水加了7ul  dntp  加了1ul   其余正常
赞一下 回复此楼
我可以哭泣，可以悲伤，但我不可以不坚强。
14楼2014-05-19 12:10:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吉部落zy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yuren2009 at 2014-05-18 16:52:17
图中亮的位置在100bp下，也是二聚体出现的位置，很难与目的条带区分。没有条带可能是引物的问题，DNA量要求不大。buffer含镁离子的那种？

如果是二聚体的话，那么亮度与模板DNA的量有关系么？
赞一下 回复此楼
我可以哭泣，可以悲伤，但我不可以不坚强。
15楼2014-05-19 12:11:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吉部落zy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 怎么都行 at 2014-05-17 22:31:34
我不知道你的DNA浓度多大，但根据经验判断，20ul体系里面加四分之一体积的模版，是不是有点太多了？

DNA是拿试剂盒提取的  大约50-100ng/ul之间 每次不定  开始加1ul  没有条带 ，以为是引物出了问题和dna浓度不够，后来加大dna的量  就出来了
赞一下 回复此楼
我可以哭泣，可以悲伤，但我不可以不坚强。
16楼2014-05-19 12:14:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-19 12:52:25
引用回帖:
15楼: Originally posted by 吉部落zy at 2014-05-19 12:11:41
如果是二聚体的话，那么亮度与模板DNA的量有关系么？...

二聚体的产生主要与引物有关，比如引物自身结构，特异性等。跟DNA用量也有关系，如果引物有很好的特异性，能与DNA很好的结合，反而DNA用量低时二聚体会增多。当然也不排除与DNA质量有关，比如断裂等。你还要考虑PCR的条件。
赞一下 回复此楼
学习使你立于不败之地
17楼2014-05-19 12:21:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by 吉部落zy at 2014-05-19 12:08:36
dNTP是10mM  引物为10mM   没活力是 2U/ul...

dNTP加0.4ul，酶加0.5ul，20ul的PCR体系是比较合适的
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
18楼2014-05-19 12:54:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

TroyKing5513

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-19 19:00:29
我们实验室常用的是25或50ul体系的PCR，50的话，就是buffer 5，DNA 1，引物 一 1，引物二 1， dNTP    1，酶 1，水 40.  如果25体系的话就都减半。做过数十次了，即使是DNA浓度特别低也都能P出来。我用的引物是357和518.
赞一下 回复此楼
19楼2014-05-19 13:17:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吉部落zy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-19 12:54:02
dNTP加0.4ul，酶加0.5ul，20ul的PCR体系是比较合适的...

刚开始做的时候 ，加的和你的差不多，没批出来，可能是枪不好使，1ul以下几乎没有。。。
赞一下 回复此楼
我可以哭泣，可以悲伤，但我不可以不坚强。
20楼2014-05-19 18:34:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 吉部落zy 的主题更新
222/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学 +21 妮妮ninicgb 2026-04-04 24/1200 2026-04-07 09:38 by clyblh
[考研] 288环境专硕,求调材料方向 +21 lllllos 2026-04-04 24/1200 2026-04-07 08:08 by xihu1109
[考研] 262求调剂 +7 天下第一文 2026-04-04 8/400 2026-04-05 21:31 by 激流勇渡
[考研] 298求调剂 +3 manman511 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:09 by kk112233
[考研] 313求调剂 +5 海日海日 2026-04-04 5/250 2026-04-05 15:52 by jndximd
[考研] 生物学308分求调剂（一志愿华东师大） +8 相信必会光芒万� 2026-04-05 10/500 2026-04-05 12:19 by Hdyxbekcb
[考研] 313求调剂 +3 海日海日 2026-04-04 3/150 2026-04-05 07:48 by 544594351
[考研] 324求调剂 +9 想上学求调 2026-04-03 9/450 2026-04-04 23:57 by 果冻大王
[考研] 283求调剂 +4 mcbbc 2026-04-03 5/250 2026-04-04 20:51 by imissbao
[考研] 278求调剂 +3 依旧！ 2026-04-02 4/200 2026-04-04 20:27 by 蓝云思雨
[考研] 291求调剂 +4 迷蒙木木 2026-04-01 5/250 2026-04-04 15:59 by sihailian3
[考研] 一志愿北京科技大学材料工程085601，求调剂 +17 cdyw 2026-04-02 18/900 2026-04-04 11:14 by w_xuqing
[考研] 268求调剂 +8 你好tg 2026-04-03 9/450 2026-04-04 05:08 by gswylq
[考研] 求调剂 +4 压力??大 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:36 by 啵啵啵0119
[考研] 土木水利328分求调剂 +6 疾风知劲草666 2026-04-02 6/300 2026-04-03 11:38 by znian
[考研] 085801 总分275 本科新能源 求调剂 +19 bradoner 2026-04-01 23/1150 2026-04-03 10:07 by linyelide
[考研] 372分材料与化工（085600）一志愿湖南大学求调剂 +5 蓝笺片 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:37 by dongzh2009
[考研] 285求调剂 +14 AZMK 2026-04-02 14/700 2026-04-02 15:54 by 上九天揽月（好�
[考研] 一志愿北京科技大学材料学硕328分求调剂 +6 1段时间 2026-03-31 7/350 2026-04-02 13:57 by 3041
[考研] 292求调剂 +17 木虫er12138 2026-04-01 17/850 2026-04-01 21:37 by 七度不信任
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭