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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 克隆5KB左右的基因，两个多月了还没进展，求帮忙啊！！！！
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米粒儿308

铁虫 (初入文坛)

[求助] 克隆5KB左右的基因，两个多月了还没进展，求帮忙啊！！！！ 已有9人参与

本人是个新手，现在要克隆个5kb的基因，已经进行了两个多月了还没进展，不知道该怎么办，那位大侠能帮帮忙啊？
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1楼 2014-05-13 16:20:16
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Neo2000

木虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-05-13 18:00:07
没进展是什么个情况，能说仔细点么?

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2楼2014-05-13 17:31:27
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-05-16 13:12:03
gyesang: 回帖置顶 2014-05-16 13:12:04
你绕了那么远，还是没说到实验细节上，一个劲的说整不出来，有意义吗？你用什么酶，程序，引物都没交代，我真帮不了你

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12楼2014-05-15 15:06:42
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by 米粒儿308 at 2014-05-15 15:14:39
额，新手，不太会使用介个，见谅哈~
引物是上游：ctaaacgcgtaccggtcaat
         下游    ttctggcagcttttgtttcc
         模版：拟南芥基因组DNA
         酶：KOD -PLUS-NEO
        程序predenature:94度   ...

你用primer-blast算下，TM是多少，然后找个便宜的mix扩下，退火时间长点，半分钟一分钟都可以的，扩增速度以一分钟一kb算

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17楼2014-05-15 19:54:43
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