应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 请问有人用双酶切过petduet-1载体吗？用bamHI和Hind3 双酶切
51/1返回列表
查看: 1623  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

飘零星lin

金虫 (小有名气)

[求助] 请问有人用双酶切过petduet-1载体吗？用bamHI和Hind3 双酶切 已有2人参与

用bamHI和Hind3 双酶切空载体petduet-1，thermo公司的酶，怎么才可以知道切完全？我要将一个300bp的小片段insert,转化后电泳一直条带位置不对，理论应该跑得更慢，结果比原质粒跑快了很多。不明所以。求经验分享！谢谢大家。在转化之前有没有什么办法判断酶切成功？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-05-07 12:14:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零星lin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zep616745243 at 2014-05-07 15:16:37
转化之前证实双酶切完全与否不太容易，因为空载体的双酶切与单酶切在普通电泳上很难区分开，那个小片段很可能跑不出条带，PAGE电泳可以试试

实在不行可以一试，谢谢
赞一下 回复此楼
5楼2014-05-07 17:51:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

zep616745243

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-07 15:25:03
转化之前证实双酶切完全与否不太容易，因为空载体的双酶切与单酶切在普通电泳上很难区分开，那个小片段很可能跑不出条带，PAGE电泳可以试试
赞一下 回复此楼
只有不断地失败才会成功
2楼2014-05-07 15:16:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

猪尾巴草

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-05-07 19:05:59
你先提高酶切质粒和酶切目的片段浓度，按你的经验觉得切开后，T4连接酶连接过夜，然后跑胶，你会看见不同的几条带，有自连的，有没连接上的目的片段和载体片段，有你需要连接有目的片段的载体，然后根据你的bp量大小，胶回收所需条带，再转染感受态，涂板，培养，这样试试看。
  希望对你有帮助。
赞一下 回复此楼
3楼2014-05-07 16:17:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零星lin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 猪尾巴草 at 2014-05-07 16:17:57
你先提高酶切质粒和酶切目的片段浓度，按你的经验觉得切开后，T4连接酶连接过夜，然后跑胶，你会看见不同的几条带，有自连的，有没连接上的目的片段和载体片段，有你需要连接有目的片段的载体，然后根据你的bp量大小 ...

pcr目的片段用同一条件双酶切可以看到切下来的100多bp,是否可以证明同一条件酶切的空载体也酶切完全？另外，我跑电泳的时候，30min的时候我看到条带位置在5000以下，但是再跑10min条带位置在5000以上，这样正常吗？
赞一下 回复此楼
4楼2014-05-07 17:27:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 5/250 2026-08-23 14:33 by KM5EcsNQRBPn
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 8/400 2026-08-23 14:30 by KM5EcsNQRBPn
[基金申请] 什么时候开奖？ +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 9/450 2026-08-23 10:44 by IXZuIJ2Q7OVy
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 07:41 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 03:52 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 03:40 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭