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gg880712

新虫 (初入文坛)

[求助] 最近做western blot 遇到问题,请各路大神指教 已有2人参与

小的做一个外泌蛋白的western,用flag标签标记了这个蛋白,目的大小预测为71KD,如果去掉信号肽的话也有69KD,但杂交总得到两条条带,一条是70KD左右的目的条带,另一条大概60KD左右,甚至条带比目的条带还要深,感觉不像杂带。
        请问大神们这是怎么一回事?会不会和信号肽有关系?会不会和蛋白构象有关系?
        坐等指教啊!

最近做western blot 遇到问题,请各路大神指教
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gg880712

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-05-08 14:33:50
剪切是RNA剪切,一个基因可能会有多个表达蛋白,比如某个外显子子被剪切掉或者内含子保留等,从而翻译出来的蛋白发生改变。
酶可能存在不同的异构体...

嗯 我这个是细菌里的,所以应该不存在内含子啥的了。
如果有异构体的话,western上样前蛋白不是都煮了?
煮了以后所有结构应该都破坏了吧?
8楼2014-05-08 14:54:11
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gg880712

新虫 (初入文坛)

有没有人帮帮我啊。。。
2楼2014-05-07 10:11:57
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我也是用Flag,也有多带。用多克隆抗体的时候还有比目的带强的杂带,多克隆抗体也会有杂带。
3楼2014-05-08 09:18:29
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gg880712

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-05-08 09:18:29
我也是用Flag,也有多带。用多克隆抗体的时候还有比目的带强的杂带,多克隆抗体也会有杂带。

就是说有杂带是正常现象?
4楼2014-05-08 10:45:04
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