24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2068  |  回复: 8

gg880712

新虫 (初入文坛)

[求助] 最近做western blot 遇到问题,请各路大神指教 已有2人参与

小的做一个外泌蛋白的western,用flag标签标记了这个蛋白,目的大小预测为71KD,如果去掉信号肽的话也有69KD,但杂交总得到两条条带,一条是70KD左右的目的条带,另一条大概60KD左右,甚至条带比目的条带还要深,感觉不像杂带。
        请问大神们这是怎么一回事?会不会和信号肽有关系?会不会和蛋白构象有关系?
        坐等指教啊!

最近做western blot 遇到问题,请各路大神指教
图片2.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gg880712

新虫 (初入文坛)

有没有人帮帮我啊。。。
2楼2014-05-07 10:11:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我也是用Flag,也有多带。用多克隆抗体的时候还有比目的带强的杂带,多克隆抗体也会有杂带。
3楼2014-05-08 09:18:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gg880712

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-05-08 09:18:29
我也是用Flag,也有多带。用多克隆抗体的时候还有比目的带强的杂带,多克隆抗体也会有杂带。

就是说有杂带是正常现象?
4楼2014-05-08 10:45:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gg880712: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-05-08 12:31:54
有杂带是正常情况
尤其是你自己制作的抗体,更是如此。
但是你的图显示那个应该不是杂带,因为你的其他背景比较干净。
可能情况是,该基因是否只有一种剪切表达形式?
另外,你用大胶跑一下,你的条带分的不是太明显
最后,如果条件允许,做个双向电泳看看到底是啥情况,说不定是个新发现
天行健
5楼2014-05-08 10:54:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gg880712

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-05-08 10:54:38
有杂带是正常情况
尤其是你自己制作的抗体,更是如此。
但是你的图显示那个应该不是杂带,因为你的其他背景比较干净。
可能情况是,该基因是否只有一种剪切表达形式?
另外,你用大胶跑一下,你的条带分的不是太 ...

谢谢啦~我对蛋白了解不多,想请教下什么是蛋白的剪切表达形式?
我这个蛋白是几丁质酶,酶会有不同的剪切表达形式么?
6楼2014-05-08 12:31:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

引用回帖:
6楼: Originally posted by gg880712 at 2014-05-08 12:31:07
谢谢啦~我对蛋白了解不多,想请教下什么是蛋白的剪切表达形式?
我这个蛋白是几丁质酶,酶会有不同的剪切表达形式么?...

剪切是RNA剪切,一个基因可能会有多个表达蛋白,比如某个外显子子被剪切掉或者内含子保留等,从而翻译出来的蛋白发生改变。
酶可能存在不同的异构体
天行健
7楼2014-05-08 14:33:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gg880712

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-05-08 14:33:50
剪切是RNA剪切,一个基因可能会有多个表达蛋白,比如某个外显子子被剪切掉或者内含子保留等,从而翻译出来的蛋白发生改变。
酶可能存在不同的异构体...

嗯 我这个是细菌里的,所以应该不存在内含子啥的了。
如果有异构体的话,western上样前蛋白不是都煮了?
煮了以后所有结构应该都破坏了吧?
8楼2014-05-08 14:54:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gg880712 at 2014-05-08 10:45:04
就是说有杂带是正常现象?...

Yes
9楼2014-05-08 18:38:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gg880712 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求计算机方向调剂 +3 Toffee2 2026-04-16 6/300 2026-04-19 22:37 by ll叶
[考研] 297,工科调剂? +11 河南农业大学-能 2026-04-14 11/550 2026-04-19 20:07 by Equinoxhua
[考博] 申博自荐 +4 Linxia林夏 2026-04-13 4/200 2026-04-19 19:55 by Equinoxhua
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +5 白云123456789 2026-04-13 5/250 2026-04-19 18:12 by Equinoxhua
[考研] 求调剂推荐 +9 小聂爱学习 2026-04-14 9/450 2026-04-19 17:03 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀,最好在一个月之内的,研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 6/300 2026-04-19 13:00 by Aaron_zyn
[考研] 一志愿沪9,326求生物学调剂 +12 刘墨墨 2026-04-13 12/600 2026-04-18 23:31 by 路病情
[考研] 297,工科调剂? +5 河南农业大学-能 2026-04-14 5/250 2026-04-18 15:17 by Equinoxhua
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 295分求调剂 +5 ?要上岸? 2026-04-17 5/250 2026-04-17 16:51 by fenglj492
[考研] 药学求调剂 +14 喽哈加油 2026-04-14 16/800 2026-04-16 10:15 by beilsong20
[考研] 求调剂学校 +14 不会吃肉 2026-04-13 16/800 2026-04-15 21:59 by noqvsozv
[考研] 一志愿A区211,22408 321求调剂 +6 随心所欲☆ 2026-04-15 7/350 2026-04-15 21:45 by lbsjt
[考研] 各位老师好,求调剂,本科211,一志愿天津大学生物与医药学硕,差两名录取。 +11 路六六jjj 2026-04-13 11/550 2026-04-14 16:01 by zs92450
[考研] 085408光电信息工程专硕355一志愿长春光机所调剂 +6 王ymaa 2026-04-13 13/650 2026-04-14 11:33 by 王ymaa
[考研] 245求调剂 +6 冰糖橘?汽水 2026-04-13 10/500 2026-04-14 10:49 by jyl0317
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
信息提示
请填处理意见