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scqwdq123新虫 (小有名气)
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细菌原生质体提取 已有1人参与
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哪位虫友做过革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的原生质体提取呢？我不做融合什么的，只要提取出来即可，非微生物专业，不懂得还请大家帮帮忙 谢谢~~~ |
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革兰氏阳性菌株取5 mL 菌悬液，加入5 mL 溶菌酶溶液，溶菌酶浓度为100 ug/mL，混匀后于36℃水浴保温处理30 min，定时取样，镜检观察原生质体形成情况，当95%以上细胞变成球状原生质体时，用4000 r/min 离心10 min，弃上清液，用高渗缓冲液洗涤除酶，然后将原生质体悬浮于5 mL 高渗缓冲液中。 革兰氏阴性菌要获得其原生质体要比阳性菌复杂得多，因为其细胞壁不仅有肽聚糖，还有脂多糖等等。 一般来说要获得其原生质体需要在培养细菌过程中加入足够量的EDTA以此来激活其细胞壁对于溶菌酶的活性，再用溶菌酶来处理获得。用来研究用的革兰氏阴性菌一般被制成球状体（原生质球），即保留一部分细胞壁的革兰氏阴性菌。 可参考：不同因素对两株细菌原生质体制备的影响 作者：郑重谊 |
2楼2014-04-28 17:26:02
scqwdq123
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3楼2014-04-29 09:43:57
