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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » DNA退火与淬火
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bingczi

铜虫 (小有名气)

[求助] DNA退火与淬火已有2人参与

各位大神，求帮助！几种DNA探针的形成方式有什么不同？刚入行 什么都不懂，先谢了！
1、95度5分钟，缓慢降至室温
2、95度5分钟，50度保持1小时
3、95度5分钟，迅速放入冰浴....
不同方式形成的DNA结构在纯度等各方面有差异吗？
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1楼2014-04-27 19:18:08
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更深的蓝

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-30 10:41:04
方法1和2都可以；2快一些，温度不一定是50℃，最好是低于你的双链Tm值5-10℃，30min完全足够，杂交缓冲液中要有一定的离子强度，如50mM及以上的NaCl或者加10mM MgCl2促进杂交
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低调务实！
4楼2014-04-29 21:07:24
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更深的蓝

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
bingczi: 金币+3, ★★★很有帮助, 哪种方法可以最大程度的形成我想要的双链？（不形成或少形成其他杂链结构） 2014-04-29 11:19:16
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-30 10:41:00
1和2都是使DNA杂交或者形成二级结构（如发夹）
3是消除二级结构或破坏双链形成单链（但是这个形成的ssDNA中肯定还有dsDNA）
赞一下(2人) 回复此楼
低调务实！
2楼2014-04-28 11:11:08
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bingczi

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 更深的蓝 at 2014-04-28 11:11:08
1和2都是使DNA杂交或者形成二级结构（如发夹）
3是消除二级结构或破坏双链形成单链（但是这个形成的ssDNA中肯定还有dsDNA）

谢谢~ 还想知道： 哪种方法可以最大程度的形成我想要的双链？（不形成或少形成其他杂链结构）
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3楼2014-04-29 11:19:55
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meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-30 10:41:08
bingczi: 金币+2, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2014-05-08 20:37:48
primer anneal么？我用过1XNEB buffer 3，然后PCR仪98度5分钟，然后每个循环降0.2度，每个循环1秒，就是缓慢降温，对长片段效果还不错，短片断也可以，不过效果稍差。
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5楼2014-04-30 05:37:55
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