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bingczi

铜虫 (小有名气)

[求助] DNA退火与淬火 已有2人参与

各位大神,求帮助!几种DNA探针的形成方式有什么不同?刚入行 什么都不懂,先谢了!
1、95度5分钟,缓慢降至室温
2、95度5分钟,50度保持1小时
3、95度5分钟,迅速放入冰浴....
不同方式形成的DNA结构在纯度等各方面有差异吗?
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
bingczi: 金币+3, ★★★很有帮助, 哪种方法可以最大程度的形成我想要的双链?(不形成或少形成其他杂链结构) 2014-04-29 11:19:16
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-30 10:41:00
1和2都是使DNA杂交或者形成二级结构(如发夹)
3是消除二级结构或破坏双链形成单链(但是这个形成的ssDNA中肯定还有dsDNA)
低调务实!
2楼2014-04-28 11:11:08
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bingczi

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 更深的蓝 at 2014-04-28 11:11:08
1和2都是使DNA杂交或者形成二级结构(如发夹)
3是消除二级结构或破坏双链形成单链(但是这个形成的ssDNA中肯定还有dsDNA)

谢谢~ 还想知道: 哪种方法可以最大程度的形成我想要的双链?(不形成或少形成其他杂链结构)
3楼2014-04-29 11:19:55
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-30 10:41:04
方法1和2都可以;2快一些,温度不一定是50℃,最好是低于你的双链Tm值5-10℃,30min完全足够,杂交缓冲液中要有一定的离子强度,如50mM及以上的NaCl或者加10mM MgCl2促进杂交
低调务实!
4楼2014-04-29 21:07:24
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meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-30 10:41:08
bingczi: 金币+2, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2014-05-08 20:37:48
primer anneal么?我用过1XNEB buffer 3,然后PCR仪98度5分钟,然后每个循环降0.2度,每个循环1秒,就是缓慢降温,对长片段效果还不错,短片断也可以,不过效果稍差。
5楼2014-04-30 05:37:55
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Ryan0415

铜虫 (小有名气)

请问具体那种方式能最大程度的纯化茎环结构,谢谢
6楼2018-01-20 21:46:25
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